血红蛋白的提取和分一轮复习课件.pptVIP

血红蛋白的提取和分一轮复习;;阅读第65页的相关内容，回答以下问题： 1、电泳的概念； 2、电泳的原理； 3、电泳的种类； 4、SDS的作用。;1、概念; 十二烷基磺酸钠（SDS）—聚丙烯酰胺凝胶电泳; SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是单条肽链的分子量。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种电荷间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。;1、凝胶色谱法的别名：分配色谱法 是根据相对分予质量的大小分离蛋白质的有效方法。 ;基础知识　　　　（一） 凝胶色谱法;1、我们在什么地方遇到过缓冲物质的？ 2、缓冲物质有哪些？ 3、缓冲溶液的作用是什么？ 4、怎样配制缓冲溶液？;1、缓冲溶液概念;①弱酸和弱酸盐组合;思考： 你认为在血红蛋白整个实验中用的缓冲液是什么？ 它的目的是什么？; 二、实验操作;血液 100mL;(2)血红蛋白的释放：;甲苯层（无色透明）;(4)透 析：;透析过程动画演示;（3）样品加入与洗脱;（3）样品加入与洗脱;思考下面的问题：; 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即:样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即:样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。;（三）SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）; 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。; 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。; 教学反馈 ;5．血液由血浆和各种血细胞组成，其中（ ）的含量最多。 A白细胞 B血小板 C红细胞 D淋巴细胞 6．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（ ）。 A. NaCl B.甲苯 C.蒸馏水 D.柠檬酸钠 7．将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层， 其中第3层是（ ） A无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液 D其他杂质的暗红色沉淀物;34．（8分）【生物—生物技术实践】 生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，???学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。 用于生产生物柴油的植物油不易发挥，宜选用_____、_____方法从油料作物中提取。 （2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供____，培养基灭菌采用的最适方法是____法。 （3）测定培养液中微生物数量，可选用_____法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测______，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。 （4）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的_____技术。;【答案】（1） 压榨；萃取（注：两空顺序无先后） （2）碳源 高压蒸汽灭菌 （3）显微镜直接计数 酶活性（或：酶活力） 固定化酶（或：固定化细胞） （4）PCR（或：多聚链式反应，聚合酶链式反应）