高速逆流色谱分离纯化抗生素课件.ppt

高速逆流色谱分离纯化抗生素; 内 容 提 要 一 高速逆流色谱技术简介 二 溶剂选择 在逆流色谱中的重要性 三 高速逆流色谱技术分离纯化抗生素实例 ;一 高速逆流色谱技术简介 高速逆流色谱(High Speed Counter Current Chromatography, HSCCC) a 多层盘绕管；b 平衡物 ;优缺点（与HPLC等液-固色谱技术比较) 优点 分离原理不同：互补性强 无需固体作固定相 ：不存在固体对样品组分的吸附、玷污、变性、失活、拖尾等现象，能实现很高的回收率，节省昂贵的材料消耗和溶剂消耗（HPLC的1/10以下??，运行使用的后续投入较低 溶剂极性可调：无需更换不同极性的色谱柱即可实现流动相从弱极性到强极性或相反的转化 色谱柱无填料，柱内空间全部是有效空间，容积大：样品负载能力强，制备量大，重现性好 盘管总体积100mL， 一次分离量：0.5-2克 盘管总体积3000mL，一次分离量：15-60克 ;缺点 分离效率（理论塔板数）还不高（1000) N=5.54(tR/W1/2)2 一次分离所需时间还较长（以小时计） 基本原理以及溶剂系统选择等还不完善 相应的配套检测器还不够完善（溶剂干扰） 分离后样品的纯度还需HPLC等方法测定 混合溶剂的回收 ;二 溶剂选择在高速逆流色谱中的重要性 分离度Rs: 2(tR2- tR1)/W1+W2 提高分离度的方法 CCC CPC: (tR2- tR1)?, HPLC: W1+W2? ;样品：极性、溶解度、纯度（预处理） 溶剂：两相溶剂的体积应尽量相同，挥发性较强 样品+溶剂： 沉降时间（30秒)，以得到满意的固定相保留率 分配系数(K):上相中样品浓度/下相中样品浓度 0.2～2, 1最佳 样品各组分间的分离因子(?, 各组分的K值之比) 1.5 溶剂系统： 固定相保留率：75% ;表1 最佳溶剂体系选择表 极性较弱溶剂 最佳溶剂 极性较强溶剂 heptane, CHCl3 THF H2O heptane, toluene, MiBK, CHCl3, EtOAc ACO H2O heptane methyl ethyl ketone H2O THF DMSO H2O toluene, MtBE, MiBK, EtOAc MeCN H2O heptane, toluene, CHCl3, EtOAc BuOH H2O heptane, toluene, CHCl3, EtOAc PrOH H2O heptane, CHCl3, EtOAc EtOH H2O heptane, toluene, CHCl3, EtOAc, BuOH MeOH H2O heptane, toluene, CHCl3, MiBK, EtOAc, BuOH HOAc H2O CHCl3 HCOOH H2O 非水体系 Heptane THF, DMF, EtOAc, PrOH, EtOH M