基因的转移和重组体的筛选和鉴定.pptVIP

无标题;第五章　基因的转移与重组体的　;无标题;一、粘性末端的连接DNA连接酶;（一） 直接连接T4 DNA连;（1）同聚加尾法 （二）;④缺点：③优点：能把任何片段连;（2）衔接物（linker）连;（1）多核苷酸激酶处理（2）T;（二） 人工加尾形成 “粘性末;接头与接头以粘末端连接，影响与;Blunt-ended DNA;三、PCR产物的连接1.在引物;三、PCR产物的连接1.在引物;带酶切位点的PCR产物GCAG;AAdNTPTTdTTPTaq;三、Gateway 载体构建系;三、Gateway 载体构建系;三、Gateway 载体构建系;第二节 重组体导入受体细胞一;（一）转化（transform;制备感受态细胞增加受体菌细胞膜;制备感受态细胞1、将处于对数生;10ng载体DNA100?L感;（2）电转化法　　原理：在高压;无标题;（二） 转　导由噬菌体和细胞病;体外包装过程;二、重组DNA导入真核细胞（一;1. 利用原生质体进行转化 ;酵母0.1mol/L LiCl;4. 电击转化（1）适于原生;二、重组DNA导入真核细胞（一;（二）导入植物细胞1. 农杆;（二）导入植物细胞1. 农杆;（二）导入植物细胞1. 农杆;（二）导入植物细胞1. 农杆;在饲养平皿的滤纸上培养2天叶盘;又称生物弹击法、微弹轰击法，借;无标题;具体操作 1. DNA微弹;植物细胞原生质体纤维素酶和果胶;二、重组DNA导入真核细胞（一;原理：（三）导入动物细胞1. ;无标题;操作简便，成本低廉、可大批量转;2. 脂质体介导法脂质体包埋;无标题;应用玻璃显微注射器，直接把外源;无标题;二乙氨乙基（DEAE）葡聚糖为;DEAE-dextran外源D;无标题;三、转化率及影响因素转化率（c;三、转化率及影响因素例：取1μ;三、转化率及影响因素例：某一D;三、转化率及影响因素普通的亚克;1）载体DNA类型、大小；重组;一、载体表型选择法二、根据插入;1. 抗药性标记及其插入失活选;2. ?-半乳糖苷酶显色反应选;?-半乳糖苷酶使X-gal分解;利用插入的外源基因的表达产物特;例：抗生素抗性抗性基因载体外源;有插入片段的重组载体的分子量比;2. 酶切电泳筛选法根据外源;无标题;四、PCR扩增检测法应用PCR;五、核酸杂交检测法 1. So;2. Northern blo;3. Western blot;膜胶蛋白② 转膜③ 杂交待测;4. 原位杂交筛选;利用抗体作为“探针”，检测产生;DNA测序是最为准确的重组子鉴;（1）大肠杆菌的β-D-葡萄糖;（1）获得目的基因；（2）目的;1、什么是感受态细胞？简述Ca