流式细胞仪BDFACSVerse操作规程.pdfVIP

BD FACSVerse 流式细胞仪样品测试操作流程 1．开机前或关机后检查鞘液桶中是否需要添加鞘液；清空废液桶中的废液后，添加 500ml NaClO 溶液（NaClO 原液稀释20 倍使用）清洗废液桶，并用纯净水清洗干净（注意：仪 器运行时最好不要进行此项操作）；鞘液成分：一定浓度的NaN3 （叠氮化钠）或使用标 准较高的纯净水； 2 ．开电脑（仪器开机密码：BDIS#1 ），电脑主机显示屏右下角网络连接图标显示为×号； 3 ．按下仪器Power 键，启动仪器（正常启动，电源键为绿色），20 分钟后激光器预热完成； 4 ．待×号变为！时，即可运行 FACSuit 软件（软件密码：bdadministrator ）；连接成功，则 工作界面左下角状态符号显示为 Connected ；液流系统就绪，则工作界面左下角状态符号 显示为Fluidics ； 5 ．仪器开机或运行时出现故障，根据提示信息操作后仍然无法修正，根据以下途径获得故障 发生时产生的报告：a)在FACSuite 软件中的Cytometer Maintenance Generate System Health Report ，根据日期、时间将生成的两个文件拷贝出来：system health report connected_ 月日年 txt.和zip 文件。b) 关闭FACSuite 软件，在电脑桌面上找到ServiceClient 文件夹， 打开，找到ServiceClient.exe 文件，双击打开，选择Cytometer Connect Get Log File， 根据提示将其存在自定义的位置，将以上文件发送给您所在区域的工程师或技术支持，或 拨打400-819-9900 以获得准确、有效的支持； 6 ．正式测定样品前，自下而上执行以下4 步操作：Cytometer Fluidics （1）SIT Flush 反冲，执行此步操作前取下样品管（自动结束）；（2 ）Purge Sheath Filter 排气泡、清洗；（3 ）Drain and Fill Flow Cell 流动室排空气，上样针处添加一管干净的蒸 馏水，点击确定；（4 ）Clean Curvette 清洗流动室，此步所需水量稍多，管中水量不能 太少（2～3ml ）； 7 ．上述4 步完成之后，先做一个水样，测试仪器状态，Flow rate 调制High ，水样较为干净 时，Threshold Rate 值较小，一般在50events/s 以下； 8．水样完成之后，取下样品管，进样针上的指示灯为黄色，指示灯变为绿色时，即可套上测 试样品； 9 ．第一个测试样品为阴性对照样品（细胞未用任何荧光染料进行染色），Flow rate 调制Low ， 主要用于调试电压，电压调试好之后，细胞位于 FSC-A ×SSC-A 图像角落；阴性对照样 品需要的量较多，应加大备用量；样品测试时，先点击Preview （采样，但不收集数据）， 1 然后调试电压，点击 Restart ，重复 3 次左右即可将电压调适好；电压调试好之后，点击 Acquire ，开始采样同时收集数据； 10．测试完成之后，操作软件中点击next tube 添加新的样品管（该管属性带有上一样品管属 性），并选中；取下样品管，仪器自动反冲（灯光为黄色），灯光变为绿色即可上下一个 样品；下一个测试样品为单个荧光染料进行染色的样品，主要用于调整荧光补偿值；调整 好之后，荧光染色细胞重心高度与阴性对照细胞一致，其它荧光强度数值为0 ； 11．样品用n 种染料进行荧光标记，则需要进行n 次调整荧光补偿值；单个染料进行荧光标 记，则不需要调整荧光补偿值； 12．测试完成之后，操作软件中点击next tube 添加新的样品管（该管属性带有上述所有样品 管属性），并选中；取下样品管，仪器自动反冲（灯光为黄色），灯光变为绿色即可上正 式样品管（多重荧光染料同时标记不同类群的细胞）； 13．正式样品测试完成，即可进行数据分析，包括门的设置（分析某一类群细胞）、添加十 字象限、细胞成分分析； 14．样品测试全部完成，执行dai