重组质粒的连接转化及筛选.pdfVIP

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2019-10-01 发布于天津
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重组质粒的连接转化及筛选第一节概述质粒具有稳定可靠和操作简便的优点如果要克隆较小的片段且结构简单质粒要比其它任何载体都要好在质粒载体上进行克隆从原理上说是很简单的先用限制性内切酶切割质粒和目的片段然后体外使两者相连接再用所得到重组质粒转化细菌即可完成但在实际工作中如何区分插入有外源的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的通过调整连接反应中外源片段和载体的浓度比例可以将载体的自身环化限制在一定程度之下也可以进一步采取一些特殊的克隆策略如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化还可以利

重组质粒的连接、转化及筛选第一节概述质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA 片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌, 即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA 的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA 片