3酶的分离纯化-2.pptVIP

在浓度为7.5% 的凝胶中，大多数生物体内的蛋白质能得到 满意的分离效果。因此，把浓度为7.5% 凝胶称为标准胶。对于 一个未知样品，常用7.5%的标准胶或4%-10% 的凝胶梯度来测试， 而后选出适宜的凝胶浓度。 用于研究大分子核酸的凝胶多为2.4%的大孔凝胶，此时凝 胶太软，不易操作，可加入0.5%琼脂糖，或在3%凝胶中加入20% 蔗糖以增加机械强度而又不影响凝胶孔径大小。 back 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 系统的不连续性表现在以下几个方面： 1.凝胶由上、下两层凝胶组成，两层凝胶的孔径不同，上层为大孔径的浓缩胶，下层为小孔径的分离胶。 2.缓冲液离子组成及各层凝胶的pH不同。电极缓冲液为pH8.3的Tris-甘氨酸缓冲液，浓缩胶为pH6.7的Tris-HCl缓冲液，而分离胶为pH8.9的Tris-HCl缓冲液。 3.在电场中形成不连续的电位梯度。 在这样一个不连续的系统里，存在三种物理效应，即样品的浓缩效应，凝胶的分子筛效应和电荷效应，由于这三种物理效应，使样品分离效果好，分辨率高. 8.3 8.3 8.9 6.7 凝胶层由上至下分别为：样品胶、浓缩胶、分离胶 样品胶 包含样品的大孔径凝胶 浓缩胶 用于样品浓缩成导线的大孔径凝胶，不含样品，其它与样品胶一样 分离胶 使样品中各组分电泳分离的孔径较小的凝胶 back SDS