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细胞水平的再分化:愈伤组织生长、不断分裂,分化出不同的细胞类群。主要有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、石细胞、纤维细胞等。 组织水平的再分化:在高水平生长素条件下,最常见的是微管束(Vascular tissue)的分化。松散的愈伤组织内含大量拟分生组织或瘤状结构;致密的愈伤组织内组织分化很少,大多由高度液泡化的细胞组成。 器官水平的再分化:由分化出的不同组织形成各种器官,如芽、茎、叶、根等。 根据起源不同,分为两种类型: 直接器官发生(器官型):直接从外植体的细胞形成器官原基,然后发育成器官。 间接器官发生(器官发生型):先形成愈伤组织,再由愈伤组织产生不同的器官原基,后形成不同器官。 植株水平的再分化(植株再生):根、茎或芽器官的发生可使植株重建。先诱导分化出芽,后形成根较好。 离体培养中再生植株的主要途径有: 器官发生 胚胎发生 1)、器官发生途径: 由愈伤组织或外植体诱导形成不定根或不定芽,再获得再生植株的方法。 百合鳞叶培养 外植体器官发生途径 愈伤组织 芽分化 再生苗 胚状体 小麦 愈伤组织器官发生途径 组织培养植株再生的途径 魔芋胚状体 2)体细胞胚胎发生途径(胚状体发生途径) : 是指在组织培养中起源于一个非合子细胞,经过胚胎发生和胚胎发育过程(经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期),形成具有双极性的胚状结构,而发育成再生植株的途径。 2、影响细胞再分化因素: 从理论上讲,在离体培养条件下经过再分化可获 得各种类型的细胞、组织、器官以及再生植株。但是目前,还不能让所有植物的活细胞都再生植株。主要原因是: (1)不同植物种类再分化的能力差异很大; (2)对某些植物再生条件还没有完全掌握。 第二节 离体条件下植物器官发生 植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团(愈伤组织)分化形成根、芽、茎等器官的过程。不定根、不定芽是指在一些非正常发生部位形成的根或芽,离体培养中通常是指从愈伤组织上发生的根或芽。 一、器官发生再生植株的方式: A 先形成芽,芽的基部后产生后根; B 先形成根,根上再出芽; C 愈伤组织的不同部位形成芽和根,然后形成微管束组织把两者结合起来. 二、器官发生的过程: 分为两种: 经过愈伤组织的器官发生 不经过愈伤组织的器官发生 经过愈伤组织的器官发生过程 愈伤组织形成 生长中心形成 器官原基及器官形成 外植体 愈伤组织 芽 根 再生植株 脱分化 再分化 高生长素(2,4-D) 高(生长素/细胞分裂素) 低(生长素/细胞分裂素) 器官发生途径 不经过愈伤组织的器官发生过程 有两种情况: 外植体直接发生芽 茎尖培养中芽形成 第三节 植物体细胞胚胎发生 一、什么是植物体细胞胚胎发生? 定义:植物离体培养的细胞、组织、器官产生类似胚的结构,其形成也经历一个类似合子胚胎发生和发育过程,这种现象称为植物体细胞胚胎发生,形成的类似胚的结构称为体细胞胚或胚状体。 体细胞胚胎发生具有普遍性,目前已在200多种被子植物上观察到体胚发生过程。 第二章 植物组织培养 的基本原理 影响植物离体形态发生的因素 细胞全能性和细胞分化 器官发生 体细胞胚胎发生 第一节 植物细胞全能性和细胞分化 植物组织培养的核心理论: 植物细胞全能性理论(Haberlandt, 1902)。 细胞全能性概述 细胞脱分化 细胞再分化 定义:1902年由Haberlandt提出,即植物体细胞在适当的条件下,具有不断分裂和繁殖、发育成完整植株的能力。 20世纪80年代,每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息,在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息,分化出植物有机体所有不同类型细胞,形成不同类型的器官甚至胚状体,直至形成完整再生植株。 一、植物细胞的全能性(Totipotency) 从一个细胞发育成一个植株 植物细胞全能性的证明是通过1958年Steward等胡萝卜根段细胞体胚发生试验及1964年Guha等进行的曼陀罗花药培养。 细胞全能性的相对性: 细胞全能性并不意味着任何细胞均可以直接产生植物; 动植细胞全能性的表现程度存在明显的差异. 细胞按照分裂能力分为三类: 第一类是始终保持分裂能力,如茎尖、根尖及形成层细胞; 第二类是永久失去分裂能力的终端分化细胞,如筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞; 第三类是在通常情况下不分裂,但在受到外界刺激后可重新启动分裂的细胞。如表皮细胞及各种薄壁细胞。 一个植物细胞向分生状态回复过程所能进行的程度,取决于它在自然部位上所处位置和生理状态。 根据细胞
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