第九组展示—差异显示反转录PCR技术2稿.ppt

差异显示反转录 PCR PRESENTED BY 第九组 DDRT-PCR 我们要了解些什么？ ·什么是DDRT-PCR？ ·DDRT-PCR的过程和原理 ·DDRT-PCR的实际应用 1 DDRT-PCR： 是什么高大上的东西？ * DDRT-PCR简介 差异显示反转录PCR技术，又称传统mRNA差异显示技术。 它是一种将不同的mRNA 它属于研究 它可以同时显示和 研究 其创始人为 这是一项有中国人参与研发的成果哦~ 成cDNA并进行 逆转录 比较 的技术。 基因的选择 性表达 的相关技术之一。 多个基因 在细胞中的表达水平。 Liang P（中国） 和 Pardee A。 * 2 各细胞的mRNA： 快来找不同！ poly(A)尾5’上游的2个碱基 只能有12种可能的排列组合 * 3--------------------------------------------- M’N’TTTTTTTTTTT 5 cDNA的一条链 3--------------------------------------------- M’N’TTTTTTTTTTT 5 cDNA的一条链 3--------------------------------------------- M’N’TTTTTTTTTTT 5 cDNA的一条链 5 ---------------------------------------------M N AAAAAAAAAAA…AAn 3 mRNA 3 MNTTTTTTTTTTT 5 primer mRNA-cDNA 杂合子 5xxxxxxxxxx3 随机 primer 3 MNTTTTTTTTT......5 3----------------------------------- M’N’TTTTTTTTT...... 5 5xxxxxxxxxx3 5xxxxxxxxxx3 5‘xxxxxxxxxx----------------------------M N AAAAAAAA......3‘ cDNA第二链 5‘xxxxxxxxxx---------------------M N AAAAAAAA......3‘ cDNA第二链 5‘xxxxxxxxxx------------M N AAAAAAAA......3‘ cDNA第二链 5xxxxxxxxxx3 5‘xxxxxxxxxx---------------------M N AAAAAAAA......3‘ PCR产物电泳（放射自显影） 对比观察 cDNA mRNA-cDNA 杂合子 对照系组织细胞 被诱导细胞 总mRNA 总mRNA 12种特定引物逆转录 两种引物分别PCR两条链 放射性核苷酸标记 让我们来看看 完整的过程 随机引物扩增第二链 PCR产物电泳（放射自显影） 对比观察 回收差异条带（挖挖挖！） 基因测序 从cDNA文库中获取差异基因 用差异基因做奇奇怪怪（有用）的事 * 实际应用 球虫耐药性基因的筛选 THANK YOU PRESENTED BY 第九组 这是因为随着PCR循环的增多，扩增规模迅速增大，Taq酶、dNTP、引物，甚至DNA模板等各种PCR要素逐渐不敷需求，PCR的效率越来越低，产物增长的速度就逐渐减缓。当所有的Taq酶都被饱和以后，PCR就进入了平台期。由于各种环境因素的复杂相互作用，不同的PCR反应体系进入平台期的时机和平台期的高低都有很大变化，难以精确控制。所以，即使是96次PCR重复实验，各种条件基本一致，所得结果有很大差异。 这是因为随着PCR循环的增多，扩增规模迅速增大，Taq酶、dNTP、引物，甚至DNA模板等各种PCR要素逐渐不敷需求，PCR的效率越来越低，产物增长的速度就逐渐减缓。当所有的Taq酶都被饱和以后，PCR就进入了平台期。由于各种环境因素的复杂相互作用，不同的PCR反应体系进入平台期的时机和平台期的高低都有很大变化，难以精确控制。所以，即使是96次PCR重复实验，各种条件基本一致，所得结果有很大差异。