第十二讲 DNA文库的构建.ppt

基因组文库和cDNA文库的构建;第一节 基因组文库的构建;;;限制性内切酶;;;4 基因组文库的质量标准;5 基因组DNA文库构建的程序 (噬菌体基因组文库的构建) ;大相对分子质量(high molecular weight,HMW)基因组DNA的提取方法 ;;;;;;;;基因组DNA文库;第二节 cDNA文库构建;;;;4 cDNA文库构建的步骤;cDNA文库的构建：;;4.1 细胞总RNA的提取和mRNA的分离;;;4.2 cDNA第一链的合成;;②随机引物引导的cDNA合成法 (randomly primed cDNA synthesis) 根据许多可能的序列，合成出6-10个核苷酸长的寡核苷酸短片段（混合物），作为合成第一链cDNA的引物。 在应用这种混合引物的情况下，cDNA的合成可以从mRNA模板的许多位点同时发生，而不仅仅从3’-末端的oligo(dT)引物一处开始。;4.3 第二链cDNA的合成;①自身引导合成法 获得的单链cDNA3’端会形成发夹结构的能力，以此作为第二链合成的引物，在大肠杆菌聚合酶I Klenow或反转录酶的作用下，合成cDNA的第二链。 ;;②置换合成法 ;RNase H ：特异水解与DNA 杂交的RNA上的磷酸二酯键，产生带有3‘—OH和5’—P的产物;③引导