【步步高】2017届高考生物（浙江专用）二轮文档讲义：专题25基因工程与克隆技术.docxVIP

考纲要求　1.工具酶的发现和基因工程的诞生[加试(a)]。2.基因工程的原理和技术[加试(b)]。3.基因工程的应用[加试(a)]。4.活动：提出生活中的疑难问题，设计用基因工程技术解决的方案[加试(c)]。5.植物的克隆[加试(b)]。6.动物的克隆[加试(a)]。 考点一　基因工程　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 1．基因工程的诞生及其操作工具 (1)基因工程的含义 ①概念：把一种生物的遗传物质(细胞核、染色体脱氧核糖核酸等)移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。 ②核心：构建重组DNA分子。 (2)基因工程的基本工具 2．基因工程的基本操作步骤 3．基因工程的应用 (1)基因工程与遗传育种 ①转基因植物 培育优点eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(a.所需时间较短,b.克服远缘亲本难以杂交的缺陷)) ②转基因动物 a．含义：转入了外源基因的动物。 b．培育优点：省时、省力。 (2)基因工程与疾病治疗 ①基因工程药物 如通过大肠杆菌生产胰岛素治疗糖尿病，通过酵母菌生产乙肝疫苗等。 ②基因治疗指的是向目标细胞中引入正常功能的基因，以纠正或补偿基因的缺陷，达到治疗的目的。 (3)基因工程与生态环境保护 ①利用转基因植物生产聚羟基烷酯，用于合成可降解的新型生物塑料。 ②改造分解石油的细菌，提高其分解石油的能力。 ③利用转基因微生物吸收环境中的重金属，降解有毒化合物和处理工业废水。 [思考诊断] 1．限制性核酸内切酶只能用于切割目的基因(　×　) 提示　也可用于切割质粒。 2．DNA连接酶能将两碱基间通过形成的氢键连接起来(　×　) 提示　两核苷酸间通过形成的磷酸二酯键连接起来。 3．质粒是小型环状DNA分子，是基因工程常用的载体(　√　) 4．DNA连接酶能够将任意2个DNA片段连接在一起(　×　) 提示　具有相同粘性末端的2个DNA片段连接在一起。 5．抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达(　√　) 基因工程操作步骤的解读： 1．获得目的基因 (1)已知序列：化学合成法或PCR扩增。比如：根据蛋白质的氨基酸序列推测出目的基因的序列，然后用DNA合成仪直接合成；分离细胞中的mRNA，再逆转录合成目的基因。 (2)未知序列：建立一个包含目的基因在内的基因文库，从基因文库中获取。 2．形成重组DNA分子 (1)一般采用同种限制性核酸内切酶切割载体和目的基因，以获得相同的粘性末端，便于拼接形成重组DNA分子。 (2)当目的基因两侧的粘性末端相同时，这两个末端可能会拼接在一起，导致目的基因自身环化。另外，目的基因两侧粘性末端相同意味着它和载体正、反两个方向都能拼接，拼接不正确可能会影响目的基因的表达。因此，为防止载体、目的基因的自身环化或任意拼接，可采用双酶进行切割。 (3)用DNA连接酶连接时，会形成3种不同的两两拼接产物：目的基因—载体拼接物、目的基因—目的基因拼接物、载体—载体拼接物，因此后期需要进行筛选。 3．将重组DNA分子导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射法 氯化钙处理 常用受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 4.筛选含有目的基因的受体细胞 (1)利用标记基因进行筛选：标记基因是载体上已知功能的基因，若将其成功导入受体细胞，则受体细胞会表达出该基因的产物，从而呈现相应性状，而未成功导入的受体细胞则无此产物或未呈现相应性状，因此可利用标记基因对含有目的基因的受体细胞进行筛选。标记基因一般是抗生素的抗性基因，其作用原理如下图： (2)核酸分子杂交法检测：用目的基因的模板链作为分子探针，利用核酸分子杂交技术，检测细胞中是否存在与之配对的DNA或mRNA链，若有，则说明目的基因成功导入。 5．目的基因的表达 (1)分子水平看产物：从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体反应。 (2)个体水平看性状：观察生物个体是否出现目的基因所控制的性状，如转基因抗虫棉是否出现抗虫性状。 题型一　基因工程的原理、工具和技术 　与DNA有关的酶的比较 项目 作用底物 作用部位 形成产物 限制性核酸内切酶 DNA分子 磷酸二酯键 粘性末端 DNA连接酶 DNA片段 磷酸二酯键 重组DNA分子 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 子代DNA DNA解旋酶 DNA分子 碱基对间的氢键 形成脱氧核苷酸单链 DNA(水解)酶 DNA分子 磷酸二酯键 游离的脱氧核苷酸 1.下列关于限制性核酸内切酶和DNA连接酶的说法中，正确的是(　　) A．其化学本质都是蛋白质 B．DNA连接酶可恢复DNA分子中的氢键 C．在基因工程中DNA聚合酶可以替代DNA连接酶 D．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是同一种酶 答案　A