试验一分子生物学实验--（精选）公开课件.pptVIP

实验遵循的原则 ①忠于实验流程 ④设平行对照实验 ②关注实验要点 ⑤准确的试剂用量 ③准备充足的实验材料 ⑥数据整理 注意： ⑴第一次实验成功，第二次实验马虎。 ⑵实验精度：①必须严格按照实验流程进行的操作； ②较严格的实验操作，允许5%的变动； ③允许20%变动的实验操作； ④不需要特别注意的实验操作。 ⑶酶促反应不顺利时，若加入更多的酶或DNA，结果会 越来越糟。 ⑷不设平行对照实验往往是实验失败的原因。 ⑸样本标记的零乱也往往是实验失败的重要原因。 第二节 实验室规则与安全 ⒈实验室规则 ⑴保持肃静 ⑵保持整洁 ⑶严格操作 ⑷注意节约 ⑸保证安全 ⒉实验室常识 ⑴使用贵重仪器如分析天平、分光光度剂、离心 机等倍加爱护，使用前熟知使用方法，使用时 严格遵守操作规程，发生故障时，立即关机。 ⑵凡挥发性、有烟雾、有毒和有气味的实验，均 应在通风柜内进行。 ⑶配制试剂时，应对试剂纯度、结构式、分子质量等 特性熟悉，做到“有的放矢”。 ⑷量瓶是量器，不要用量瓶做容器。 ⑸洗净器皿应倒置架上，使其自然风干。 ⒊实验室安全 ⑴《实验室生物安全通用要求》查看 ⑵了解电闸、水阀煤气总阀门所在处，离开实验室检 查是否关好。 ⑶使用电器设备时严防触电。 ⑷使用高温高压锅灭菌时不得离人。 ⑸使用可燃物，特别是易燃物，应特别小心。 ⑹凡使用腐蚀性试剂，必须谨慎操作，防止溅出。 ⑺废液特别是强酸强碱，应稀释后倒入水池。 ⑻有毒物品应按照实验室规定办理审批手续后方可领 取，使用时严格操作，用后妥善处理。 ⒋实验室急救 ⑴触电 ①关闭电源； ②用干木棍将导线与被害者分开； ③将被害者移至木板上，与地面分离； ④急救者必须做好触电安全措施，手脚必须绝缘。 ⑵火灾 隔绝氧气 ①起火物与水相容：水、湿布、沙土、灭火器等 ②起火物与水不相容：不可用水 ⑶烫伤 乙醇消毒，涂2%苦味酸或5%鞣酸，防感染 ⑷玻璃割伤或其他器械损伤 清理伤口，硼酸水洗净，涂碘酒，包扎 ⑸灼伤皮肤 ①强碱：大量清水稀释，涂5%硼酸或2%乙酸 ②强酸、溴：大量清水稀释，5%NaHCO3或5%氨水 ⑹煤气中毒 呼吸新鲜空气  第三节 常用器皿与仪器 1、塑料制品 Eppendrof 管 2、微量移液器（枪） 移液器的工作原理 移液器工作的基本原理是活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液和放液的。在活塞推动下，排出部分空气，在大气压作用下吸入液体，再由活塞推动空气排出液体。由于弹簧具有伸缩性，在移液器的使用中要配合弹簧的这个特点来操作，就可以很好地控制移液的速度和力度。普通的微量移液器是采用内置式气体活塞（见图 1），如 Eppendorf Research?和 Reference?系列移液器（见图 2），活塞设计在移液器内部，依靠推动空气来进行吸液和放液，活塞不与液体直接接触。 另一种移液器是采用外置式活塞，活塞设计在吸头内部，直接与液体接触，适用于粘度比较大或易产生气泡的液体的操作，如 Eppendorf Multipette?分液器，配合 Combitips?分液头使用（见图 3）。 第一步 设定移液体积● 从大体积调节至小体积时，为正常调 节方法，逆时针旋转刻度即可， 从小 体积调节至大体积时，可先顺时针调 至超过设定体积的刻度，多调1/3圈，再回调至设 定体积，可保证最佳的精确度。 移液器规范操作步骤 第二步 装配移液器吸头 ● 对于单道移液器，将移液器端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可； 特别提示用移液器反复撞击吸头来上紧的方法是非常不可取的，长期这样操作，会导致移液器中的零部件因强烈撞击而松散，严重的情况会导致调节刻度的旋钮卡住。（见图5） ● 多道移液器装配吸头时，将移液器的第 一道对准第一个吸头，倾斜插入，前后 稍许摇动上紧，吸头插入后略超过O型 环即可。（见图6） 图5 图6 第三步 吸液和放液 垂直吸液 吸头尖端需浸入液面3mm以下 慢吸慢放，控制好弹簧的伸缩速度 放液时吸头尖端可靠容器内壁 特别提示 5mL 和 10mL 的移液器要配合滤芯使用，吸液时，吸头需浸入液面以下 5mm，慢吸液体，达到预定体积后，在液面下停顿 3秒，再离开液面。 移液小技巧 ● 预润湿吸液 粘稠液体可以通过吸头预润湿的方式来达到精确移液，先吸入样液，打出， 这时吸头内壁已经吸附了一层液体，使表面吸附形成饱和，然后再吸入样 液