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PAGE PAGE 1 有关基因工程中的“酶切”和“酶连”的题型分析 【学习目标】 1.会分辨不同的黏性末端，并会书写黏性末端及产生过程 2.会自主分析单酶切和双酶切产生的结果 3.会选择正确的限制酶切割目的基因和质粒 4.会判断及分析限制酶的切割位点在质粒或DNA上的个数及位置 5.会分析切割后的质粒与DNA片段连接形成的重组质粒种类 6.会分析限制酶切割重组质粒产生的DNA片段种类 考查1.限制酶切割产生的黏性末端 例1：下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端是相同的？其末端序列为何种？ A．BamHI和EcoRI；其末端序列-TTAA B．BamHI和HindⅢ；其末端序列-CTAGC．EcoRI和HindⅢ；其末端序列-TCGA D．BamHI和BglⅡ；其末端序列-CTAG 考查2.限制酶切割产生的DNA片段的种类 例2：（16年泰州期末）已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现在多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是 A．3 B．4 C．9 D． 12 例3：（12年江苏）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题 若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是 末端，其产物长度为 。 （2）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有 种不同DNA片段。　 考查3.选择相应的限制酶切割目的基因、质粒 例4：（12年江苏）若将例3题图1和图2中质粒和目的基因D通过同一种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 。 例5：转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答： 构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶 ，对 进行切割。 考查4.判断限制酶的切割位点在质粒或DNA上的个数及位置 例6：（16年南京一模）用限制酶EcoR Ⅰ、Kpn Ⅰ和二者的混合物分别降解一个1 000 bp(1 bp即1个碱基对)的DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，凝胶电泳结果如下图所示。该DNA分子的酶切图谱(单位：bp)正确的是(　　) 例7：（11年江苏）用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb即1000个碱基对)，请在下面指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。 考查5.切割后的质粒与DNA片段连接形成的重组质粒种类 例8：（09年江苏）图中②表示Hind = 3 \* ROMAN III与Bam = 1 \* ROMAN I酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得 种重组质粒；如果换用Bst l与BamH l酶切，目的基因与质粒连接后可获得 种重组质粒。 考查6：限制酶切割重组质粒产生的DNA片段种类 例9：（08年江苏）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。 ①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 【学以致用】 （16年苏锡常镇一模）pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3666bp(bp表示碱基对)，其结构如下图所示。图中PRPL是启动子，rrnB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄青霉素抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoRⅠ、HindⅢ等为各种限制性内切酶。请据图回答下列有关问题： 该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切