分子荧光和化学发光.pptVIP

* 金属离子催化鲁米诺-H2O2体系的化学发光反应大都属于单电子氧化过程．例如： Mn+ + HO2-→Mn+·HO2- Mn+·HO2-+鲁米诺＋H2O→M(n+1)++ 鲁米诺游离基＋3OH- 鲁米诺游离基+HO2-→化学发光 上述历程中Mn+（如Co2+）参与了反应，价态升高，本身是还原剂． * 四、液相化学发光的测量仪器 大多数化学发光和生物发光测量仪器称为光度计，因为这类仪器只有光电检测，没有单色器提供光色散．也有人称这类仪器为发光光度计．商品名称则更为多种多样． 液相化学发光的一个重要优点是仪器比较简单，一般仅有进样系统和检测系统组成 ． * 化学发光仪示意图 * 1. 进样系统 进样系统包括化学发光反应地、试样注射器、聚光和控温装置等．保证试样能在反应池内均匀混合，产生的光辐射供检测系统检测．进样分静态注射和流动注射两种方式． （1）试样反应池 　反应池的材料可根据不同要求选择玻璃、石英或塑料等，池的形状要与光电管的有效接受面积相匹配．若为流动分析则其形状、大小都要严格要求． * （2）进样器 在静态注射进样方式中，进样器通常为微量吸量管或各种形式的注射器，容积从微升到毫升不等．若为流动注射进样方式，用泵代替注射器或加有注射阀． * （3）聚光装置 为了提高检测效率，通常在试样池的后方装一聚光装置．这种装置可以是凹面镜，简单的也可用一平面镜，也可直接在池子外面半圆圈周上镀一个镜面，使化学反应的光辐射能有效地到达光电管接受面．好的聚光装置可使进入检测器的光达50%． * （4）进样方式 　在静态注射进样方式中，可以是反应物混合后最后注入分析物，也可以是分析物与介质混合后再注入反应物．应根据分析要求和反应体系特点，选择最佳进样程序．静态进样的优点在于反应条件容易选择且使用方便，仪器价格也较低廉． * 在流动注射进样方式中，传递分析物和反应物都是通过泵来实现的，它的反应池是一个透明性良好的盘管．分析时用泵驱动试剂进入流动系统，样品经注入阀注入到反应试剂的溪流中，试剂和试样在流动过程中进行混合（主要在盘管中混合），并在盘管中产生化学发光，用置于盘管正前方的光电倍增管检测光信号．流动注射式自动化程度高、分析速度快，便于连续监测和批量分析．另外，流动注射分析的准确度和精密度也较好． * 2. 检测系统 检测系统包括光电转换、信号放大、信号处理和数据显示等部分．光信号转换为电信号由光电倍增管来完成．对于某一特殊用途的仪器，仅要求检测器的光谱响应最大值与指定应用体系的化学发光光谱峰值相同或相近即可；对通用仪器，则管子光阴极的光谱响应范围越宽越好，以适应各种不同的发光体系． * 五、影响液相化学发光强度的主要因素 1．溶液酸度 不同的化学发光体系要求在不同的pH值下进行才能获得最大的发光强度．试液的酸度会影响发光活性物质的有效浓度，对化学发光强度直接产生影响，所以反应液及试液的酸度对化学发光强度影响很大．每个发光体系的最佳酸度都应该通过实验确定并严格进行控制． * 2．试液的注入速度 在固定其他条件的情况下，一般来说，试液注入的速度越大，体系发光强度的线性变化也越大．所以，对静态注射式液相化学发光仪来说，开启试液活塞的速度应尽量快且每次要均匀一致．这样，可使分析结果既有高的灵敏性又有好的重现性． * 3．干扰物质的存在 　在痕量分析中，有微量的干扰物质存在便会引起污染而导致试验失败．所以，所用的仪器必须清洁，试剂纯度要高，蒸馏水的本底值应尽量低且应进行空白试验，实验室的环境应严格进行控制． * 对于具体的发光体系，若存在其它离子或物质干扰，应采取措施如加入适当的掩蔽剂消除干扰，以便提高测定的选择性．例如，用鲁米诺体系测定铬（III）时，加入EDTA，邻菲啰琳可消除Ca2+、Mg2+、Fe3+、Cu2+、Co3+等许多金属离子的干扰． * 若用掩蔽剂等简单方法不能排除干扰，可考虑采用色谱等分离技术． 各种溶液的浓度，仪器的增益及负高压的选择，温度及发光时间等都会对发光强度产生显著影响． * 酶反应与化学发光技术的结合，可提供选择性和灵敏性都很好的测定方法．微机在化学发光仪器中的应用，涉及到数据采集、条件优化、光谱贮存和自动控制等多方面． 采用微机控制的二极管阵列化学发光光谱仪能够得到化学发光反应时的光谱，适应于一秒内或更短时间就结束的快化学发光反应的光谱测定． * 在新技术的应用上，还应提到的是，无机耦合反应与化学发光反应的配合．这种配合可以使一些不能直接用化学发光法测定的元素和无机物能用化学发光法间接测定．这类方法通常称为无机耦合反应化学发光法，它极