基因工程基本实际操作程序.pptVIP

（2）若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法是 ，若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用 检测或将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一段时间后，加入碘液，工程菌周围出现透明圈。 DNA分子杂交技术 抗原抗体杂交 9、为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （2）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。 （3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方 法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 基因枪法（花粉管通道法） 植物组织培养 脱分化 再分化 耐盐基因（目的基因） 一定浓度盐水浇灌 （移栽到盐碱地中） 随堂检测 1、基因工程的正确操作步骤是（ ） ①目的基因与运载体相结合 ②将目的基因导入受体细胞 ③检测目的基因的表达 ④提取目的基因 A．③④②① B．②④①③ C．④①②③ D．③④①② C 2、从基因文库中获得目的基因，不能依据的（ ） A．基因的核苷酸序列 B．mRNA序列 C．基因功能 D．RNA聚合酶 D 3．启动子、终止子、密码子的化学本质依次是 A．DNA、DNA、DNA B．DNA、RNA、RNA C．RNA、DNA、RNA D．DNA、DNA、RNA D 4、能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是 A.启动子 B. 氨苄青霉素抗性基因 C.复制原点 D. 四环素抗性基因 A 5、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是 A．启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码 B．启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对mRNA的转录起调控作用 C．标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选 D．基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别 A 三　将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 转化—— 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 特点: 农杆菌能感染双子叶植物和祼子植物,对大多数单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 整合 植物细胞染色体DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 转化过程: （2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 常用于单子叶植物的转化方法 （2）基因枪法——微弹轰击法 特点：成本高 适用于单子叶植物 （3）花粉管通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 我国转基因抗虫棉就是用这种方法获得 用花粉管通道法导入受体细胞的目的基因是否需要和载体结合？为什么？ 需要 因为目的基因只有和运载体结合成基因表达载体才能在受体细胞中稳定维持和表达 2、将目的基因导入动物细胞 方法: 显微注射技术 操作程序: 提纯含目的基因表达载体 取卵（或受精卵） 显微注射 移植到子宫 早期胚胎 新性状动物 转基因小白鼠 3、将目的基因导入微生物细胞 常用法：Ca2+处理 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受