基因工程基本原理重组基因导入受体细胞.pptVIP

（3） 荧光素标记探针：用荧光素标记核酸、抗生物素蛋白或抗地高辛抗体。 荧光物质异硫氰酸荧光素（黄绿色） 罗丹明（红色） 羟基香豆素（兰色） 3. 标记探针的方法 （1） 切口平移标记法 （2） 随机引物标记法 （3） 末端标记法 （4） PCR标记法 （5） 光敏标记法： 光敏基团 （6） 化学衍生结合标记法： （7）交叉相连标记法： 对重组体克隆进行筛选和鉴定的方法之一是利用核酸杂交法进行筛选，它包括Southern印记杂交法、Northern印记杂交、斑点印记杂交和（菌落原位杂交）杂交。 各种杂交中需要对探针进行标记，其中对探针进行非放射性标记的常见标记物有（荧光素）、（生物素）、（地高辛）。 标记探针的方法（切口平移标记法）、（随机引物标记法）、（末端标记法）、（PCR标记法）、（光敏标记法）、化学衍生结合标记法以及交叉相连标记法。 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( a ) (a)诱导宿主的α肽的合成 (b)诱导宿主的ω肽的合成 (c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂 α-互补筛选属于下列哪种筛选方法：(B) A.抗药性标志选择 B.标志补救 C.原位杂交法 D.酶联免疫吸附 E.分子杂交 应用α-互补筛选重组体时，含有外源基因的重组体菌落颜色应为：(C) A.紫色 B.蓝色 C.白色（阻遏蛋白不能表达） D.无色 E.以上都不是 水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（筛选标记）( C ) A.促使目的基因导入宿主细胞中 B.促使目的基因在宿主细胞中复制 C.使目的基因容易被检测出来 D.使目的基因容易成功表达 建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆? （二） 核酸探针杂交分析 基本原理：具有一定同源性的两条核酸（DNA或RNA）单链在适宜的温度及离子强度等条件下，可按碱基互补配对原则高度特异地退火形成双链。 探针：用于检测的核苷酸片段。 Southern blotting： DNA/DNA, RNA Northern blotting：RNA/DNA, RNADot blotting：DNA芯片 in situ hybridization：组织原位杂交 Western blotting：蛋白质/抗原、抗体 （1）Southern印迹杂交 1975年由英国人southern创建 待测的核酸序列：DNA 探针：DNA或RNA 电转移方法： 湿式电转移 半干式电转移 （2）Nouthern印迹杂交（1979年，J.C.Alwine等） 待测的核酸序列：RNA 探针：DNA或RNA （3）斑点印迹杂交和狭线印迹杂交 待测的核酸序列：DNA和RNA 探针：DNA或RNA （4）菌落（噬菌斑）原位杂交 Grunstein和Hosness，1975年 （5）荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH） 用特定荧光素如生物素、地高辛等标记探针，与靶DNA进行杂交，通过免疫细胞化学过程连接上荧光素标记物，在荧光显微镜下观察探针标记或位点的技术。 实验流程： FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→（染色体显带）→荧光显微镜检测→结果分析。 　组织原位杂交（Tissue in situ hybridization）简称原位杂交，指组织或细胞的原位杂交。是经适当处理后，使细胞通透性增加，让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交，因此原位杂交可以确定探针互补序列在胞内的空间位置。 （6） 组织细胞的原位杂交 （7） 影响探针杂交的因素 探针分子与目标分子之间序列的同一性 探针的长度：500b 探针浓度 杂交加速剂：硫酸葡聚糖 杂交漂洗液的组成、反应温度、盐浓度 四、免疫化学分析检测 待测物：蛋白质 探针：抗原、抗体 抗体测定法 免疫沉淀法 分类 （一） 抗体检测法 放射性抗体测定法 非放射性抗体测定法 分类 1. 放射性抗体测定 Broome和Gilbert,1978年 2. 非放射性抗体测定 （二） 免疫沉淀测定法（Immunoprecipitation, IP） 是一种研究蛋白质间交互作用的生物技术，这种技术是将蛋白质视为抗原，并利用抗体与之进行特异性结合的特性，来进行研究。这项技术可用来将含有上千种不同蛋白质的样品中，分离和浓缩出特定蛋白质。 （三） 转译筛选法 杂交抑制转译检测法 杂交选择转译