分析化学中常用分离与富集方法.pptVIP

叶绿素? 叶绿素 叶黄素?， ? 叶黄素? 色谱法（层析法、色层法）Chromatography 1905年俄国植物学家M.G. 茨维特 （Tswett）提出 CaCO3 固定相 stationary phase 石油醚 流动相 mobile phase §6 色谱分离法 展 开 示 意 图 分离原理： 利用物质在两相中的分配系数（由物理化学性质：溶解度、蒸汽压、吸附能力、离子交换能力、亲和能力及分子大小等决定）的微小差异进行分离。 当互不相溶的两相做相对运动时，被测物质在两相之间进行连续多次分配，这样原来微小的分配差异被不断放大，从而使各组分得到分离。 色谱分离法的分类（按流动相与固定相聚集态分类） 气相色谱 液相色谱 超临界流体色谱 毛细管电泳 气-固色谱 气-液色谱 液-固色谱 液-液色谱 流动相：气体、液体、 超临界流体 固定相：液体、固体 1、方法原理 固定相：固体吸附剂（如硅胶、活性氧化铝、纤维素等）制成糊状，均匀涂在平滑的玻璃板上，涂层厚度约为0.25mm——制成薄层板 流动相：有机溶剂 分离机理：吸附 薄层板干燥，活化后，在下端用毛细管点上试样，放入盛有展开剂的密闭的层析缸中，试样各组分在两相间反复被溶解吸附，易被吸附的组分移动慢，从而产生差速迁移而得到分离，各组分经显色后得不同斑点，可定量测定。 用比移值Rf衡量分离情况 一、薄层色谱法 展开方法 层析缸和层析槽展开 薄层色谱法点样及展开过程 取一大小适宜的薄层板 在薄层板的下端点上标准和样品 放在层析筒中展开 取出，标记前沿， 晾干 着色，分析 简单分离装置如P369图11-11所示 Rf值最大等于1 （随溶剂一起上升到前沿），最小等于0（组分不随溶剂移动）。 Rf值是衡量各组分的分离情况的数值（Rf0.02即可得到分离）。 Rf值相差越大，分离效果越好 使用Rf值定性：将标准和样品的 Rf 值进行比较，可以对样品进行定性分析 比移值（Rf）：Rf＝a／b 2．比移值 a为斑点中心到原点的距离cm b为溶剂前沿到原点的距离cm 3、吸附剂和展开剂的选择原则 分离非极性组分：用活性强的吸附剂、非极性展开剂。极性小的组分Rf大 分离极性组分：用活性弱的吸附剂、极性展开剂。极性大的组分Rf大 4、应用 硅胶G（含煅石膏作粘合剂）薄层，适当展开剂分离各种有机磷农药。 用硅胶G薄层，以丙酮—氯仿（6：94）为展开剂，分离和测定食品中黄曲霉B1等致癌物质。 二、纸上色谱分离法 1、方法原理 固定相：滤纸上的水——利用纸上吸着的水分（一般的纸吸着约等于自身质量20％－25％的水分，其中约6％能通过氢键与滤纸纤维羟基结合，不随流动相移动——固定相） 流动相：有机溶剂（展开剂） 分离机理：根据不同物质在固定相和流动相间的分配比不同而进行分离的。 操作：点样、展开、干燥、显色 得到色谱图、测定（定性和定量） 2. 应用 甘氨酸、丙氨酸和谷氨酸混合氨基酸的分离 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝4：1：2 显色：茚三酮 葡萄糖、麦芽糖和木糖混合糖类的分离 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝4：1：5 显色：用硝酸银氨溶液喷洒，即出现Ag的褐色斑点。 定性：由Rf值可判断是哪种糖；葡萄糖的Rf为0.16，麦芽糖的Rf为0.11，木糖的Rf是0.28。 分离性质相近的金属元素，如矿石中铌N(V)－Ta(V)的分离 三、反相分配色谱分离法 固定相：有机相， 载体-有机萃取剂 流动相：水相 应 用： 用三正辛胺－纤维素色谱柱，分别用10mol·L-1盐酸，6mol·L-1盐酸和0.05mol·L-1硝酸为洗脱液，可以将Th（IV），Zr（IV）和UO22+很好地分离。 操作方法： 将试液调至萃取所需要的最佳条件，并控制一定的流速流经色谱柱； 用同样的流速及与试液相似的水溶液洗涤柱床； 控制一定的流速、温度； 根据待分离组分的性质选择不同的洗脱液淋洗，使各组分分离。 原 理： 装柱 引入试液 加洗脱剂：萃取－反萃取 －萃取重复分配 反萃取、实现分离 §7 电泳分离法 依据是带电粒子在迁移率上的差别。 电泳：在电场作用下，电解质中带电粒子以不同的速度向电荷相反的方向迁移的现象。 Q：电荷 η：黏度 r：粒子半径 环糊精类型对手性分离的影响 分离条件:背景电解质，15mmol/L [CD]-50 mmol/L磷酸盐缓冲溶液，pH=2.5；分