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n知识梳理分析基因工程的概念供体：提供目的基因 n知识梳理 分析基因工程的概念 供体：提供目的基因。 操作环境： 操作水平： 原理：_ 受体：表达目的基因。 本质：性状在受体体内表达。 优点：克服 DNA重组技术的基本工具 水平。 的障碍, 改造生物的 第1讲基因工程 ［考纲要求］1 ?基因工程的诞生(I )。2.基因工程的原理及技术(11)。3?基因工程的应用(II)o4.蛋白质工程(I )o 考点一聚焦基因工程的概念及基本工具 夯实基础突破要点 ⑴限制性核酸内切酶(简称：限制酶) ①来源：主要是从生物中分离纯化出来的。②作用：识别特定的并切开特定部位的两个核昔酸之间的 ①来源：主要是从 生物中分离纯化出来的。 ②作用：识别特定的 并切开特定部位的两个核昔酸之间的 结果：产生, ④下图中的图1和图2分别表示的是EcoR I限制酶和Sma I限制酶的作用示意图。EcoR I限制酶识别 的碱基序列是切割位点在△之间；S〃mI限制酶识别的碱基序列是些些，切割 位点在4L匚之间；说明限制酶具有 切点 G AATTC I + I CTTAA G 黏性末端中轴线切点 黏性末端 G G G + 111 C C C 中轴线( 中轴线(切点) 图2 平末端 (2)DNA连接酶 种类：按来源可分为 作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核昔酸之间的 DNA连接酶和限制酶的关系 G AA TTC 限制酶、AATTC卩〃儕DNA连接稿仲L ? (3) (3)载体 ①种类: 等。 ①种类: ②质粒的特点及对应的条件A能够 便壬 B具有 便壬 C具有 便壬 易错警示 1、巧辨基因工程操作工具的8个易错点 限制酶是一类酶,而不是一种酶。 限制酶的成分为蛋白质,其作用的发挥需要适宜的理化条件,高温、强酸或强碱均易使之变性失活。 在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶,目的是产生相同的黏性末端。 将一个基因从臥分子上切割下来,需要切两处，同时产生4个黏性末端。 不同DI3分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同,同一个DI3分子用不同的限制酶切割， 产生的黏性末端一般不相同。 限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的载体是DT3分子,能将目的基因 导入受体细胞内；膜载体是蛋白质,与细胞膜的通透性有关。 基因工程中有3种工具,但工具酶只有2种。 厶与Dfg有关的酶 -一 作用底物 作用部位 形成产物 限制酶 DI3分子 磷酸二酯键 黏性末端或平末端 DI3连接酶 DT3片段 磷酸二酯键 重组DT3分子 DI3聚合酶 脱氧核苜酸 磷酸二酯键 子代臥 DhA解旋酶 DI3分子 碱基对间 的氢键 形成脱氧核昔酸单链 Df收水解)酶 臥分子 磷酸二酯键 游离的脱氧核昔酸 3、确定限制酶的种类 F^stY SmaT F^stY , I ■ I 窈厂抗病些kZ赢 图E 根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择於fl。 不能选择切点位于目的基因内部的限制酶,如图甲不能选择S7?Io ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也可 选择用於fl和FcdRI两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。 根据质粒的特点确定限制酶的种类 所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。 质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽最不要破坏这些结构,如图乙中限制酶加I 会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个,则切割重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。 4载体上标记基因的标记原理 载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。 当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生 素r所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞r原理如下图所示: 含竹抗飙节进入受的培界站上培养大肠杆困中冇的 冇鞍体进入?冇的 没冇栽休进入亦六竹檢策疔徳索只冇存冇载体? 并M载;体上的 站内农达的大 肠杆困才能存 汪并堵殖 含竹抗飙节 进入受 的培界站上培养 大肠杆困中冇的 冇鞍体进入?冇的 没冇栽休进入 亦六竹檢策疔徳索 只冇存冇载体? 并M载;体上的 站内农达的大 肠杆困才能存 汪并堵殖 考点二基因工程的操作步骤夯实基础突破要点D知识梳理 考点二基因工程的操作步骤 夯实基础突破要点 D知识梳理 基因工程的操作过程与应用 （1）基因工程的操作步骤 获取目的基因的方法一