生物质谱技术应用基本原理与应用.pptVIP

谢谢！ 联系人： 刘向农，陆春良，刘娟，王郁杨，张艳艳 （879）79383 - 803/407 蛋白质与核酸相互作用鉴定 蛋白高级结构及蛋白-配体复合物研究 生物大分子的分子量分析 BSA 某蛋白聚合体 有机小分子研究 数据库检索 Mascot 2.3 结合Mascot Deamon搜索引擎 ProteinPilot 4.0 蛋白分析工具 一级图谱 二级图谱 Mascot Deamon Mascot Deamon ProteinPilot 使用Paragon算法同时搜索几百种种生物修饰及其它修饰、遗传变异、以及未预期的裂解方式，不会增加出现假阳性的几率，也不会延长搜索时间或是增加多级分析的复杂性。 使用嵌入式Pro GroupTM 算法进行蛋白group分析，可区分蛋白异构体，蛋白子集，并抑制假阳性。 定量工作流程 - 为iTRAQTM、ICAT?和 SILACTM试剂工作流程提供优化支持，包括4标（4plex）、8标（8plex）试剂，和用于生物标志物发现及验证的新型试剂mTRAQ。 使用反库（decoy）搜索进行自动化且严密的假阳性率（False Discovery Rate，FDR）分析，可为您的结果提供高级别的质量控制。 MALDI 样品基本要求 磷酸盐缓冲液 50 mM 重碳酸铵 30 mM Tris buffer 100 mM 胍 (盐酸盐, 硫酸盐) 1 M Triton 0.1% SDS 0.01% 碱金属盐 1 M 甘油 1% 蛋白样品具体要求 挖点或胶内酶解操作过程中不可使用劣质国产枪头和指形管，防止塑料峰污染 样品防止角蛋白污染 胶粒大小：1.5mm3以下 胶内酶解试剂（色谱级） 染色方法：考染/银染（银染试剂中不能含有戊二醛） 种属名称，搜库要求（参数） LC-MALDI的样品中不要含有乙腈，最好进行过除盐步骤 UHR-TOF maXis 超高分辨飞行时间质谱仪 仪器型号：maXis 制造厂商：德国Bruker公司 质谱类型：四级杆-飞行时间 主要技术指标： 质量范围：m/z 50～2500 质谱功能：MS，MS/MS 分辨率： 50000 ( ESI+, m/z=1222 )； 45000 ( ESI-, m/z=1334) MS质量准确度： 优于0.8ppm (全扫描，ESI+, m/z=1222，内标校正) 优于2ppm (全扫描，ESI+, m/z=1222，外标校正) MS/MS质量准确度：优于2ppm (外标校正) 同位素丰度比：平均丰度比误差小于2% (调谐标样) 扫描方式：一级质谱全扫描(MS)，二级质谱全扫描(MS/MS) 电喷雾源(ESI源) 利用高电场使质谱进样段的毛细管柱流出的液滴带电，在N2气流的作用下，液滴溶剂蒸发，表面积缩小，表面电荷密度不断增加，直至产生的库伦斥力与液滴表面张力达到雷利极限，液滴爆裂为带电的子液滴，这一过程不断重复使最终的液滴非常细小呈雾滴状，这时的液滴表面电场非常强大，使分析物离子化并以带单电荷或多电荷的离子形式进入质量分析器。 ESI源质谱技术 如果样品具有容易接收H+ 的功能团 (例如 氨基化合物、肽和蛋白质上所带的氨基) ，那么使用正离子检测法。 如果样品具有容易失去H+ 的功能团 (例如 羧酸、核酸和糖上所带的羟基) ，那么使用负离子检测法。 仪器功能及附件： 1) 离子源：配有ESI电喷雾电离源、APCI大气压化学电离源、nanoESI纳升电喷雾电离源 2) 戴安公司U3000高效液相色谱仪，配有DAD二极管阵列检测器，自动进样器，柱温箱 3) EASY-nLC纳升液相色谱仪 　 应用范围： 用于小分子有机化合物的定性分析，可提供精确质荷比和同位素丰度，推算分子的原子组成；用于中等极性和强极性大分子物质的定性分析，进行蛋白质组学等研究。 优点：高采样速率、高分辨率、高质量准确度、高质量数 Multiply Charged Ions ESI spectrum of HEW Lysozyme（溶菌酶） MW = 14,305.14 大分子样品会生成带多种电荷 (from 2 to 20 )的样品离子 A亚型 MW= 18363.5024 B亚型 MW=18277.4748 A亚型+B亚型 ESI图谱可以灵敏地反映蛋白质的构造 Native Azurin Denatured Azurin 大部分折叠、拼接或复合的蛋白质的质谱是非高斯分布 的，在图谱上只能观察到少量的峰，代表较高的m/z 值。 变性或open form 蛋白质/多肽较容易离子化，其谱图是多个高斯分布的峰。 胶和液相杂合分离路线 影响ESI因素： 样品的pKa 和溶液的pH。样品在电喷雾溶液中是否已预先形成离子取决于