微生物学-第九章感染和免疫.pptVIP

4、发光免疫测定法(Luminescent immunoassay) 将化学发光反应与免疫测定法结合起来的新型技术。 常用的发光试剂有鲁米诺（luminol)和光泽精(lucigenin)。 发光免疫测定法优点 1、可定量检测抗原或抗体。 2、灵敏度高，约比酶免疫技术高1000倍。 3、试剂稳定、无毒。 4、检测操作简便、快速（半小时至数小时）。 二、免疫检测技术的应用 免疫检测技术以广泛应用于生物科学的各个领域。 1、免疫疾病诊断 2、动物植物生理活动研究 3、物种及微生物鉴定 4、动物、植物性状的免疫标记 5、免疫增强药物和疫苗的研究 6、发病机理研究 7、分子生物学研究 1 、免疫疾病诊断 用免疫血清学方法对人和动物传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病和变态反应疾病进行诊断，是免疫技术最突出的应用。尤其是酶标抗体技术，已成为多种传染病的常规诊断方法，如已有的人各型肝炎、猪瘟等 ELISA 试剂盒，它们简便、快速，又具有高度的敏感性和可重复性。 2 、动物植物生理活动研究 动植物中存在一些如激素、维生素等活性物质，它们在体内含量极微少，但在调节机体的生理活动中起重要作用，因此通过分析测定这些生物活性物质的含量及变化来研究机体的各种生理功能（如生长生殖等）。由于这些物质含量极低，用常规化验方法难以准确测出。目前放射免疫测定和酶免技术已能精确测出 ng(10 -9 g) 及 pg(10 -12 g) 水平的物质，它们已成为测定动物、植物、昆虫中微量激素及其它活性物质，研究动物、植物生理和生物防治的重要手段。 4 、动物、植物性状的免疫标记 通过分析动物、植物的一些优良性状（如高产、优质、抗逆性等）的特异性抗原，然后用血清学方法进行标记选择育种，这是一个很有前途的方向，它比分子遗传学标记选择育种简便。 5 、免疫增强药物和疫苗的研究 疫苗研究中需用血清学反应和细胞免疫技术测定免疫的效果。在研究一些免疫增强药物，尤其研究肿瘤药物时，需用细胞免疫技术分析测定它们对机体细胞免疫功能的增强作用。因为细胞免疫是机体抗肿瘤、抗病毒的一个重要机制。 6 、发病机理研究 传染病的病原从机体特定部位感染，并在特定组织细胞内增殖，引起发病。一荧光抗体感染或免疫酶组化染色，可在细胞水平上确定发病等病原微生物的感染细胞，还可用于研究自身免疫病和变态反应性疾病的发病机理，如免疫复合物的沉积部位的分析。 7 、分子生物学研究 在基因工程的分离、克隆的筛选，表达产物的定性与定量分析，表达产物的纯化等均涉及到免疫技术。如通常用免疫沉淀方法分离 mRNA 基因，酶标抗体核酸探针（地高辛核酸探针）检测筛选克隆，免疫转印技术分析表达产物的分子量、 ELISA 或 RIA 分析表达量、免疫亲和层析纯化表达产物，免疫方法分析表达产物的性质如免疫原性。免疫技术已是分子生物学研究中必不可少的工具。 抗 体 特 性 抗体在体外可与相应的抗原特异结合而发生肉眼可见反应； 抗体在体内如与病原微生物结合，起抗传染作用，如作用于自身组织细胞，使机体发生自身免疫性疾病。 抗体存在于血清和其他体液如乳液及某些外分泌液中。 (一)、抗体的基本结构和分类 免疫球蛋白的种类很多，但其基本结构却相同。由四条多肽链组成，其中两条相同的长链叫重链（H链）, 两条相同的短链叫做轻链（L链）。两条重链借二硫键连接起来，呈Y字形，两条轻链又通过二硫键连接在Y字的两侧，所以整个免疫球蛋白分子结构是对称的。 近对称轴的一对较长的链称为重链或Ｈ链，重链的分子量约为50~75kD，由450~550个氨基酸残基组成。 在对称轴较短的一对肽链称为轻链或Ｌ链，轻链的分子量约25 kD，由214个氨基酸残基构成。 IgG分子由3个相同大小的节段组成，位于上端的两个臂由易弯曲的铰链区（hinge region）连接到主干上形成一个“Y”形分子，称为Ig分子的单体，这是构成免疫球蛋白分子的基本单位。 根据肽链中氨基酸顺序是否恒定，将Ｈ链和Ｌ链分别分为恒定区域(C区)和可变区域区(V区)。Ig的V区端是肽链的氨基末端（N端），另一端为羧基末端（C端），Ｈ链上的ＣＨＯ代表它的糖基。 免疫球蛋白的基本结构图 抗原结合位点 补体结合位点 Fc段受体结合位点 Fc为结晶片段 抗体的种类 根据抗体的作用可将抗体分为： 1）抗毒素抗体： 由外毒素（或类毒素）刺激机体产生，由于它与相应外毒素结合后可中和其毒性，因而称为抗毒素抗体。 2）抗菌抗体： 机体针对细菌抗原所产生的抗体，当与相应细菌相遇时，彼此发生结合，在有电解质存在下细菌发生凝集，这类抗体称为抗菌抗体。