着色与非着色苹果品种中磷酸化蛋白质的鉴定与分析-中国农业科学.pdf

中国农业科学 2016,49(8):1530-1539 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.08.010 着色与非着色苹果品种中磷酸化蛋白质的鉴定与分析 苑克俊，程来亮，牛庆霖，王江勇 （山东省果树研究所，山东泰安 271000 ） 摘要： 【目的】苹果着色是一个重要的质量性状，构建苹果磷酸化蛋白质组并进行鉴定与分析，了解在苹果 着色过程中的蛋白质磷酸化，为进一步阐明苹果着色机理提供参考。【方法】以着色‘嘎拉’和非着色‘金冠’ 两个品种苹果果皮为试材提取总蛋白，用 TiO2 富集磷酸化肽段，对富集到的磷酸化肽段进行高效液相色谱分离， 利用质谱鉴定磷酸化肽段，采用Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4（thermo）软件进行蛋白质查库鉴定，使 用的数据库为 Uniprot_Maloideae.fasta。对鉴定到的磷酸化肽段和蛋白质进行分析，找出着色与非着色苹果品 种中有差异的磷酸化蛋白质及其修饰位点。【结果】在着色苹果品种中鉴定到 1 323 个蛋白质、3 339 个肽段和 225 个磷酸化肽段，发现磷酸化蛋白质约 200—225 种；在非着色苹果品种中鉴定到 569 个蛋白质、1 152 个肽段 和 128 个磷酸化肽段，发现磷酸化蛋白质约 117—128 种。比较分析表明，43 个磷酸化肽段仅在非着色苹果品种 中发现，139 个磷酸化肽段仅在着色苹果品种中发现，在着色苹果品种中有更多的蛋白质发生了磷酸化，其中质 膜H+-ATPase在两个苏氨酸位点发生磷酸化，过敏原蛋白和两个蛋白激酶在丝氨酸位点发生磷酸化，3 个转录因子、 1 个钾转运蛋白和 1 个受体激酶都发生磷酸化。在两个苹果品种鉴定出的蛋白质中，发生蛋白质磷酸化的位点主 要是丝氨酸，其次是苏氨酸，在酪氨酸位点发生蛋白质磷酸化很少。蛋白质WD40和花青苷合成途径中的相关酶蛋 白C4H、4CL、CHS、CHI、F3′H、FLS、LDOX 和UFGT在着色过程中未发生磷酸化。在着色和非着色苹果品种中都存 在MYBR转录因子，并且都发生了蛋白质磷酸化。【结论】在着色苹果品种中产生了一些特有的磷酸化蛋白质，其 + 中包括已知与着色相关的质膜H-ATPase，苹果着色可能受到蛋白质磷酸化的影响。 关键词：苹果；磷酸化；蛋白质组；蛋白激酶；着色 Identification and Analysis of Phosphoproteins in Red and Non-Red Apple Cultivars YUAN Ke-jun, CHENG Lai-liang, NIU Qing-lin, WANG Jiang-yong (Shandong Institute of Pomology, Tai’an 271000, Shandong) Abstract: 【Objective 】Apple skin color is an important fruit quality factor. In order to make clear whether there is phosphorylation during apple fruit pigmentation, large scale identification of phosphoproteins and phosphopeptides was conducted. 【Method 】The fruit peels of red skinned apple cultivar ‘Gala’ and non-red skinned apple cultivar ‘Golden Delicious’ we