第十章物理作图.pptVIP

1. 限制性作图 它是将限制性酶切位点标定在DNA分子的相对位置. 其只能应用于较小的DNA分子,其上限取决于作图分子中限制酶位点的频率. 通常采用的6碱基对识别顺序的限制酶仅适合50Kb以下DNA分子的精确作图. 方法： ①用两种限制酶中的—种对DNA分子进行消化，产生片段的大小通过琼脂糖凝放电泳来检测。 ②第二种酶消化DNA分子，再用琼脂糖凝胶电泳检测片段大小。这些结果可以使我们弄清每种酶的限制位点数目，但切点之间的相对位置还不能确定。 ③将DNA分子用两种酶同时进行切割可以获得更多的信息。 ④作部分限制性酶解。这样会产生—套更复杂的产物，除了完全消化的，还含部分消化产物。通过测定一个不完全消化片段的大小，构造出正 确的图谱。 缺点 通常，部分限制酶消化为构建完整的图谱提供了必需的信息。如果有多个限制位点集中、这种分析方法就显得笨拙，因为要考虑的不同片段太多。 改进方法： 在部分消化前将放射性或其他类型的标记物加到要分析的DNA分子两端，结果很多部分限制酶消化产物成为不可见的，因为它们不含有末端片段，因此在琼脂糖凝胶上对标记物进行筛选时不会显现。我们可以利用“可见的”部分限制片段的大小，确定出那些未定位的切点与DNA分子末端的相对位置。 限制因素 1.酶切位点的数目 2.限制酶作图的规模受