05第六章分子生物学研究法下.ppt

第六章 分子生物学研究法（下） PCR的基本原理一 PCR的基本原理二 PCR的基本原理 PCR反应的体系 PCR仪 对DNA模板的要求 引 物 引物5’端外加BamHⅠ酶切 位点掺入产物的两端 引 物 引物 5’ 端修饰技术 Taq DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶 PCR的反应体系 PCR的反应体系 循环条件的设定 嵌套PCR 嵌套PCR提高产物特异性的原理 反向PCR 锚式PCR 锚式PCR扩增已知序列3’侧序列 锚式PCR扩增已知序列5’侧序列 扩增全长的mRNA序列 不对称PCR 定量PCR 定量PCR中的内标 荧光定量PCR TaqMan荧光探针（线性探针） TaqMan荧光探针工作原理 分子信标（环状探针） SYBR荧光染料 荧光定量PCR仪光路图 PCR产物与载体的连接 PCR产物与载体的A-T连接 mRNA差别显示 利用PCR的定点突变 利用PCR的定点突变 BIORAD公司的PCR之歌 二、DNA分子标记技术 遗传标记的发展 RFLP 分析 RFLP 分析 RFLP 分析 采用一种探针作 6 个栽培品种的RFLP分析 RFLP所用探针的来源 RFLP所用探针的来源 RFLP标记的共显性 什么是多态性 RFLP 标记的优点 RFLP 的不足 可变数量串联重复（VNTRs） VNTR一例 VNTR差异带的检测 父母子女间VNTR的检测结果