3第三章DNA重组的的基本操作.ppt

植物总DNA提取 1.植物总DNA提取原理及方法概述 （1）CTAB法 原理：CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（ 0.3mol/L NaCl ）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开。然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀， CTAB能溶于乙醇。 4.将上清转入另一离心管中，假如1/10体积的10% CTAB，混匀，加入等体积的氯仿/异戊醇，颠倒离心管混匀，室温下12000rpm离心10-20分钟。 5.取上相，重复4操作一次。 6.将上相转入新的离心管，加入1-1.5倍体积的1x CTAB沉淀缓冲液，混匀，室温下放置30分钟，沉淀。 7.3500-4000rpm离心5-10分钟，去上清 ，沉淀吹干。 8.按0.5ml/g材料的比例加入1mol/L乙酸铵溶液，使沉淀溶解完全，再加入7.5mol/L乙酸铵至终浓度为2.5mol/L. 9.加入2倍体积的异戊醇，混匀，室温下放置10分钟。 10. 10000rpm离心5分钟，去上清。 11.用70%乙醇漂洗沉淀，吹干，沉淀溶于适量TE。 优点： 能很好的去除糖类杂质，对于含糖较高的材 料可优先采用。 （2）SDS法 原理：