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实验二、微量吸管及计数板的使用 一、微量吸管的使用 【目的】 掌握微量吸管的使用方法。 【原理】 利用微量吸管的虹吸作用吸取血液。 【器材】 微量吸管、乳胶吸头、一次性棉签、试管、试管架、采血针。 【试剂】 洗涤液：生理盐水。 【标本】 采集末梢血 【操作】 1．准备吸管及试管： 2．加稀释液 取试管1支，加生理盐水2ml。 3．持管吸血 4．拭净余血 用干脱脂棉沿吸管口方向拭净余血，并检查血量是否达到规定刻度。 5．释放血液 将吸管插入含生理盐水的试管底部，慢慢排出吸管内的血液，再用上清液冲洗管内余血3次。 二、改良牛鲍计数板的使用 【目的】 掌握改良牛鲍计数板计数池的基本结构及使用方法。 【原理】 一定倍数稀释的血液或体液，混匀后滴入具有固定体积和精密划分刻度的改良牛鲍计数板中，在显微镜下对所选择区域中的细胞进行计数，再乘以稀释倍数，即可换算成单位体积内的细胞数。 【器材】 1．改良牛鲍计数板及盖玻片 2．其它 试管、试管架、吸管、微量吸管、乳胶吸头、绸布、显微镜。 【标本】 同上 【操作】 1．准备计数板 先用流水冲洗计数板和盖玻片除去所有残留物，然后用乙醇洗涤，最后用绸布拭净，采用推压法从计数板下缘向前平推盖玻片，将其盖在计数池上。 2.先用低倍镜(10倍物镜)观察，通过调节显微镜光栅减少光线进入量以便观察整个计数板的结构(大、中、小方格)及特征 。再用高倍镜（40倍物镜)观察红细胞计数区域。 3.充池 充分混匀溶液，用微量吸管将稀释血液滴入计数板和盖玻片交界处，利用虹吸作用让液体顺其间隙充满计数池；同样方法再给另一侧计数板充池。 4．静置计数板 充池后应平置于桌面上静置3min，待细胞下沉后计数 。 5.计数原则 需遵循一定的方向逐格进行，以免重复或遗漏。对压线的细胞采用数左不数右，数上不数下的原则。记录所数5个中方格的红细胞数和4个大方格的白细胞数。 血细胞计数板的构造 计数池划线 计数池的参数 区 域 边长（mm） 面积（mm2） 深度（mm） 体积（mm3） 计数池 3 9 0.1 0.9 大方格 1 1 0.1 0.1 计WBC中方格 0.25 0.0625 0.1 0.00625 计RBC中方格 0.2 0.04 0.1 0.004 计RBC小方格 0.05 0.0025 0.1 0.00025 * * 24×20×0.6mm 计数池划线 1 mm 1mm 美国国家标准局（NBS） 1941年规定：计数池大方格每边长度的误差应在 ± 1%内（ 10±0.01mm ）;血盖片与计数池间缝隙深度应在±2%以内(0.1±0.002mm)。 *