第23章基因工程和24章人类基因组计划.pptVIP

基因工程的概念 genetic engineering 定义： 又称为重组DNA技术，指将某些特定的基因或DNA片断，通过载体或其它手段送入受体细胞，使它们在受体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。 目的: 是生产出符合人类需要的产品或创造出稳定遗传的生物新性状。 重要特征 1、可把来自任何生物的基因转移到与其毫无关系的任何其他受体细胞中，可以任意改造生物的遗传特性，创造出生物的新性状 2、某一段DNA可在受体细胞内进行复制，为制备大量纯化的DNA片段提供了可能 ＤＮＡ－ＲＮＡ杂交分子 ２　分子探针寻找特定基因 ２３.１.２聚合酶链式反应（ＰＣＲ） ＰＣＲ 是一种体外ＤＮＡ扩增技术． 其基本原理类似于ＤＮＡ的天然复制过程． 　　　 　　　其以拟扩增的ＤＮＡ为模板，以一对分别于５’和３’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在ＤＮＡ聚合酶作用下，按半保留复制机制沿模板链延伸直至完成新ＤＮＡ 的合成，反复重复这一过程就使目的基因得到扩增． 组成ＰＣＲ反应体系的基本成分 　　　　　　模板ＤＮＡ 　　　　　　特异性引物 　　　　　　ＤＮＡ聚合酶（耐热） 　　　　　　dＮＴＰs 　　　　　　含有Ｍg２＋的缓冲液　　　　 PCR反应过程 第一步：高温变性（解链） 95 ℃ 第二步：低温退火 55 ℃ 第三步：适温延伸 72 ℃ PCR反应过程 变性：双链DNA解链成为单链DNA 退火：部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合 延伸：以目的基因为模板，合成互补的新DNA链 23.2 基因工程主要的工具酶 限制性内切酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 反转录酶 DNA连接酶及其连接作用 大肠杆菌DNA连接酶(黏性末端) 噬菌体T4DNA连接酶(黏性末端和平齐末端) 反转录酶 兼有RNA外切酶的活性 23.3 基因克隆的质粒载体 载体是运送目的基因片段进入宿主细胞的工具，目前最常用的载体包括细菌质粒。 质粒是细菌细胞中自然存在于染色体外可以自主复制的一段环状DNA分子。进入到宿主细胞中的一个质粒可以大量增加其拷贝数。 23.4.2 DNA分子的体外重组 黏性末端连接法 同一限制性内切酶作用 DNA连接酶作用 平齐末端连接法(人工接头加尾) 第24章 人类基因组 24.1 人类基因组及其组成 基因组:一个单倍体细胞核中、一个细胞器中、或一个病毒毒粒中所含的全部DNA（或RNA）分子的总称。 基因组学：研究生物体的基因和基因组的结构组成、不稳定性、和功能的科学。分为结构基因组学和功能基因组学。 结构基因组学 研究基因和基因组的结构，各种遗传元件的组成物质的序列特征，基因定位和基因组的作图等。 功能基因组学 在基因组水平上阐明DNA序列的功能，着重研究不同的序列结构所具有的不同功能，基因的表达与调控，基因和环境之间的相互作用。 人类基因组的DNA序列组成 人类基因组有3.2×109个bp的DNA，有约4万个基因。 基因及相关序列约占10%，基因外序列约占90%。 见图24.1 24.1.2 人类基因组各组成成分的基本特征 1 基因：断裂基因，存在大小差异和内含子数量的差异。 与基因相关的序列：存在于3’非编码区的3’UTR和5’端UTR，只转录而不被翻译 启动子序列存在于转录起始位点的上游。 2 基因外DNA： 70-80%为单一和低拷贝形式存在； 20-30%为中度或高度重复序列。 分散重复序列 (这些序列以散在的形式分布在基因组中) 长分散重复序列 LINE （ 1000bp，一万份） 短分散重复序列 SINE （100-300bp，10万份） 串联重复序列 1 卫星DNA（重复单元100-5000kb） 2 小卫星DNA（9-70bp） 3 微卫星DNA (1-4bp) 24.2癌基因与恶性肿瘤 肿瘤的基本特征： 　　正常的细胞的增殖和凋亡失控