基因工程 宿主与转化.pptx

生物技术 第四章 基因表达系统 基因表达系统 4.1 植物基因转化 4.2 原核表达系统 4.1 农杆菌介导的植物基因转化 一、农杆菌 农杆菌： 根瘤菌科 ( Rhizobiacease )；土壤杆菌属 ( Agrobacterium )，革兰氏阴性。 根癌农杆菌 ( Agrobacterium tumefaciens ) 放射型农杆菌 ( Agrobacterium radiobacter ) 发根农杆菌 ( Agrobacterium rhizogenes ) 悬钩子农杆菌 ( Agrobacterium rubi ) 农杆菌是植物的病原菌 根癌农杆菌感染导致冠瘿瘤的形成 The mechanism of crown gall formation has been extensively reviewed by a number of authors (Zupan et al., 2000; Zupan and Zambryski, 1995; Zambryski, 1992; Sheng and Citovsky, 1996; Hooykaas and Beijersbergen, 1994). 植物病原菌, 天然遗传转化系统 载体系统－Ti质粒 宿主范围 广泛存在于双子叶植物中，据不完全统计，约有93属 643 种双子叶植物对根癌农杆菌敏感。裸子植物对该菌也具有敏感性，能诱发肿瘤。 一般认为单子叶植物对农杆菌无敏感性。 De Cleene and De Lay (1976) reported a list of natural host plants for Agrobacterium and their list contained 42 gymnosperms, 596 dicotyledons and 5 monocotyledons. The number of monocotyledons in the list was very small and no agronomically important cereals were included. Thus, the general statement that Agrobacterium does not induce tumours on monocotyledons is not literally true, but it reflects general beliefs over a long period of time. 单子叶植物与双子叶植物对损伤的响应不同，对宿主范围有影响 3种类型 用损伤细胞作为保护层（保护层内的细胞木质化） 单子叶植物 细胞分裂，形成愈伤组织 双子叶植物 形成创伤周皮 二、冠瘿瘤形成机制 Ti质粒编码蛋白介导T-DNA转移； T链（单链）进入植物细胞核，整合到植物基因组中 1. Ti质粒 双链共价闭环DNA，分子量约200kb 迄今已从多种植物分离了不同种类的农杆菌，它们的Ti质 粒的，结构特性均已清楚。 菌株 起源 致瘤 质粒名称 B6 苹果瘤 ＋ pTi-B6 番茄瘤 ＋ pTi 15955 NCPPB1001 葡萄瘤 ＋ pTi1001 C58 樱桃瘤 ＋ pTi-C58 pAT-C58 长病桃树的土壤 ＋ pTi-1 D135 27 白杨瘤 ＋ pTi-27 EU6 卫矛瘤 ＋ pTi-EU6 pAT-EU6 Ti质粒的功能区 T－DNA整合到植物染色体 Vir