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《血红蛋白的提取和分离》学案 张建尚 江苏省赣榆高级中学 【学习目标】 1.尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法。 2.了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。 【重点和难点】 重点: 凝胶色谱法的原理和方法。 难点: 样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 【课前预习】 1.不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 ① 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ② ，移动速度 ③ ，而相对分子质量 ④ 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 ⑤ 移动，路程 ⑥ ，移动速度 ⑦ ，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 1.①较小②较长③较慢④较大⑤凝胶外部⑥较短⑦较快 2.在一定范围内，缓冲溶液抵制外界的????①?? 对溶液pH的影响，维持pH??②?? 。电泳是利用了待分离样品中各种分子 ③ 以及分子本身的 ④ 、 ⑤ 的不同，使带电分子产生不同的 ⑥ ，从而实现样品中各种分子的分离。 2.①酸或碱②基本不变③带电性质的差异④大小⑤形状⑥迁移速度 3.采用?? ?①??? 的方法分离红细胞。红细胞洗涤的目的是?? ?②? ??，以利于后续步骤的分离纯化。在洗涤好的红细胞中加入??????③??? ，充分搅拌后红细胞破裂，释放出血红蛋白。血红蛋白溶液经离心后，明显分为4层，从上到下的主要成分分别是?? ?? ④???? ??????? 。对血红蛋白溶液进行透析的目的是去除?? ⑤??? ?。 3.①低速短离心②去除杂蛋白③蒸馏水和甲苯④甲苯、脂溶性物质、血红蛋白和沉淀物⑤分子量较小的杂质 4.制作凝胶色谱柱的材料有??? ① ?????????????。 装填凝胶色谱柱的材料是??? ②???，装填时要???③???缓慢倒人色谱柱内，不能有??④? 存在。装填完后，用20mmol/L的 ⑤ 充分洗涤平衡凝胶12h。加样时用吸管小心地将1mL透析后的样品加到?? ⑥? ? 的顶端，注意不要破坏????⑦??? 。 4.①玻璃管、橡皮塞、移液管、尼龙纱、尼龙网②凝胶③一次性④气泡⑤磷酸缓冲液⑥凝胶色谱柱的顶端⑦凝胶面 【课堂探究】 一、基础知识 1.下图是凝胶色谱法分离蛋白质的原理，据图分析： 凝胶颗粒 凝胶颗粒 蛋白质a 蛋白质b A （1） （2） （3） （4） （5） B 多孔板 （1）图A中蛋白质a能进入凝胶颗粒内部而蛋白质b被排阻在凝胶颗粒外面的原因是 ① 。所以蛋白质 ② 在图B中的路程就短，移动速度 ③ ，当它从凝胶柱中洗脱出来时，蛋白质 ④ 还在行进中。 （2）除了上述原理外，还可以利用哪些原理分离蛋白质？ ① 。 一、1.（1）①蛋白质a的相对分子质量较小，蛋白质b的相对分子质量较大②b③较快④a（2）①蛋白质的形状、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力 2.人体血浆中的H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4等的作用是 ① ，体内细胞或物质在体外是否需要与体内一样的环境条件才能保持原有的生物活性？ ② 。怎样使其保持与体内一样的酸碱度呢？ ③ 。 2.①缓冲酸和碱对血浆pH的影响，维持血浆pH基本不变②是③利用配制的缓冲溶液模拟体内的pH环境 3.电泳时，带正电和负电的蛋白质在电场中的迁移方向是 ① ；若蛋白质的带电性质和数量相同，但蛋白质的分子大小不同，则蛋白质在电场中的迁移情况是 ② 。叶绿体色素分离使用的支持物是 ③ ，电泳分离蛋白质使用的支持物是 ④ 。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率完全取决于 ⑤ 。 3.①带正电的蛋白质向阴极迁移，带负电的蛋白质向阳极迁移②向同一极迁移，但分子大迁移慢，分子小的迁移快③滤纸④凝胶⑤分子的大小 二、实验操作 1.分析与样品处理有关的问题： ①②③④（1）分离红细胞离心速度不能过高和时间过长的原因是 ① 。洗涤红细胞的目的是 ②