生化的研究生实验3 重组质粒DNA提取及双酶切鉴定.pptVIP

* * * * * * * * * * * * 左下角处有超级链接到配伍末端 * * * * * * * * 溶液II：由SDS（十二烷基硫酸钠）与NaOH组成 ① SDS的作用是解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之 变性（裂解细胞和蛋白质变性作用） ② NaOH（PH12）的作用是破坏氢键，使DNA分子变性（DNA变性作用） * 溶液III：HAC和KAC组成的高盐溶液(复性作用) ①HAC溶液能中和溶液Ⅱ的碱性，使染色体DNA 变性而发生缠绕并使质粒DNA复性。 ②KAC会与SDS溶解度很低的盐，并与蛋白质形成 沉淀而除去；溶液中的DNA也会与蛋白质-SDS 复合物缠绕成大分子而与小分子质粒DNA分离。 实验步骤及注意事项 加1.5ml培养物于EP管，12000rpm×30S ① ? 除去上清，加入冰的100 μl溶液I，颠倒EP管，混匀 ? 加入200μl溶液II，温和混匀，冰浴3~5min ? 加入150μl冰溶液III，温和混匀，冰浴3~5min，12000rpm×5min ② 转移上清到新EP管，加入等体积酚，12000rpm×5min ③ 转移上清到新EP管，加入等体积氯仿/异戊醇，12000rpm×5min④ ? 上层水相转移到新EP管，加入2倍体积无水乙醇，颠倒混匀， -20 ℃ 冰箱中放置20min，12000?