应用高剂量辐射花粉授粉及幼胚培养诱导苹果单倍体-园艺学报.pdf

园　艺 　学 　报 　2001 , 28 (3) : 194～199 Acta Horticulturae Sinica 应用高剂量辐射花粉授粉及幼胚培养诱导苹 果单倍体 1 2 1 3 何道一 　孙 　山 　崔德才 　陈振光 (1 2 3 山东农业大学生命科学学院 , 泰安 271018 ;　 山东省果树研究所 , 泰安 271000 ;　 福建农业大学园艺 系 , 福州 350002) γ 摘 　要 : 以 1 000～1 500 Gy 剂量的 射线处理 ‘红星’苹果花粉 , 以此花粉给 ‘贝拉’、 ‘辽伏’和 ‘富士’苹果授粉 , 获得 3 个品种的幼胚 , 经幼胚培养得到各品种的单倍体植株 。 试验结果表明 , 影响高剂量辐射花粉技术生产苹果单倍体效率的主要因素是早期落果 、幼胚 ( ) 败育和带胚乳幼胚不能培养再生植株 。初步研究表明25 日龄幼胚 胚珠 可以培养再生植株 。 关键词 : 苹果 ; 辐射 ; 花粉 ; 单倍体 ; 胚培养 中图分类号 : S 661. 1 ; S 603 　文献标识码 : A 　文章编号 : 0513353X (2001) 植物单倍体及双单倍体材料不仅有利于遗传性状的分析 , 还可有效增强育种 目的性 , 缩短育种周期 , 提高育种效率 〔1〕, 对于象苹果这样遗传组成复杂的多年生木本果树 , 这类 材料在其性状遗传分析和育种实践中更具价值 。在苹果实生苗后代中 , 自发单倍体的频率 极低 , 要鉴定出这样的单倍体也相当费工费时 。因此 , 人工创建单倍体成为苹果单倍体生 产的首选方法 。早在 70 年代 , 就有苹果花药培养 的研究报道 〔2 ,3 〕, 只有少数获得成 〔4～6 〕 〔7 ,8 〕 〔9 〕 功 。辐射花粉技术不仅可用于诱变育种 , 而且能够诱发产生植物单倍体 , Zhang 〔10 〕 和 Witte 等曾利用 1 000 Gy 以下的辐射剂量处理具标志性状的苹果花粉 , 诱发产生了苹 果单倍体植株 。解剖观察表明 , 即使花粉受到 1 000 Gy 以上剂量的辐射处理 , 它在柱头 〔11〕 上仍能萌发 , 花粉管正常伸长到达胚囊 。因此 , 为提高辐射花粉诱导单倍体的效率 , 我们尝试利用 1 000 Gy 以上的辐射剂量处理苹果花粉诱发单倍体的效果 。 1 　材料与方法 花粉采 自山东省果树所第四分场正常挂果的壮年 ‘红星’苹果树 。在花瓣即将张开时 采取花蕾 , 在室内取出花药自然风干 。收集花粉于干燥的青霉素瓶中 , 在山东农业大学辐 照中心进行辐射处理 , 剂量率为 16 . 7 Gy ·min - 1 。处理花粉在当天进行发芽试验 。将花粉 接种于含有 10 %蔗糖 、0 . 6 %琼脂和 10 mg ·L - 1 硼酸的培养基中 , 在培养箱中 25 ℃保温 4 h , 计算 3 个不同视野的花粉及萌发数 , 取平均值 。用测微尺测量花粉管长度 。 授粉在山东农业大学实验农场果园、泰安和新泰果树专业户果园中进行 。授粉母树为 正常挂果的青壮年树 。选