第一节工具酶的发现(正式).pptVIP

基因工程的理论基础： 基因工程的技术保证： 第一节工具酶的发现和基因工程的诞生 [质粒特点] 1、细胞染色体外能自主复制的小型环状DNA分子； 2、存在于许多细菌及酵母菌等生物中； 3、最常用的质粒是大肠杆菌的质粒； 4、质粒的存在对宿主细胞无影响。 5、质粒上具有抗性基因。 例3、限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是 　　—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。 ①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 ? ②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 ? ③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？ 练习 在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 * 制作人:sjx 高 三 生 物 第一节 工具酶的发现和 基因工程的诞生 第一章 基因工程 青霉菌能产生对人类有用的抗生素——青霉素 [思考]生物体的不同性状形成的根本原因是什么? 豆科植物的根瘤能够固定空气中的氮 设想 2、人们能否通过改造生物体的基因，定向地改变 生物的遗传特性呢？ 能分泌人胰岛素的大肠杆菌 广义的“遗传工程”包括细胞水平上的遗传操作(细胞工程)和分子水平上的遗传操作(基因工程)。 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。是指按照人们的意愿,在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入到受体细胞里，定向地改造生物的遗传性状，产生出人类需要的基因产物。 基因工程-狭义的遗传工程 实质 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 、拼接 → 导入 → 表达 基因重组 限制性核酸内切酶、DNA连接酶、质粒载体的发现和应用 DNA是生物遗传物质的发现； DNA双螺旋结构的确立； 遗传信息传递方式的认定。 基因操作的工具 剪切的工具： 拼接的工具： 导入的工具： 基因的剪刀——限制性核酸内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——质粒 基因工程的“ ” 指“ 限制性核酸内切酶 ” “ ” 具特异性，识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 微生物 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 黏性末端 平末端 能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶 大肠杆菌(E.coli)的一种限制性核酸内切酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶 G A A T T C C T T A A G C T T A A G A A T T C G 切开的是什么键? 粘性末端 粘性末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 T G C A A C G T A C G T G C A T 不同的限制酶所形成的粘性末端不同 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个粘性末端？ 要切两个切口，产生四个粘性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的粘性末端，然后让两者的黏性末端粘合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 DNA 目的基因 G C A T T G C A A C G T C G T A G C A T T G C A 例1．已知某种限制性内切酶的识别序列是AAGCTT，它能够在A和A之间切断DNA分子，请写出DNA分子被该酶切割后形成的黏性末端。 基因工程的“ ” 指“DNA连接酶” “ ” 1、连接的部位： 2、结 果： 磷酸二酯键 （在“梯子”的扶手处） 连接两个互补的黏性末端。　 C T T A A G A A T T C G [练习]下列是由限制酶切割形成的DNA片段，能用相应DNA连接酶将它们恢复连接的组合是（ ） ①…CTGCA …G ②…G …CTTAA ③ G… ACGTC… ④ AATTC… G… A. ①③；②④ B. ①②；③④C. ①④；②③