分子生物学在植物营养研究中的应用.docVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　华中农业大学 《资源环境研究专题》 课 程 论 文 论 文 题 目： 　分子生物学在植物营养研究中的应用 专 业 班 级： 植物营养学 姓 名： 武　松　伟 学 号： 2012303110082 导 师： 　孙学成 副教授 2013 年 1 月 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　华中农业大学 PAGE PAGE 2 分子生物学在植物营养研究中的应用 摘要：随着植物营养学研究的发展, 越来越多的分子生物学技术用来解决植物营养学问题并取得初步的成果。本文主要介绍了四种分子标记技术：AFLP、RFLP、RAPD、SSR及其应用的研究进展。 关键词：AFLP标记技术，RFLP标记技术，RAPD标记技术，SSR标记技术，应用 前言 DNA 双螺旋模型和中心法则的提出, 明确了遗传信息传递的规律, 从而使分子生物学有了迅猛的发展, 逐渐成为生命科学中最具活力的学科。分子生物学与其它学科的结合及分子生物学技术的广泛应用, 不仅拓宽了研究领域, 而且使我们对分子水平上生命现象和生物学规律的认识更加深入。 常用的分子标记技术[1-7] 1.AFLP标记技术 AFLP是扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Lenh Polymorphism)的简称，是1993年由zabeau Marc和Vos Pieter发明的一种DNA指纹技术。AFLP技术的原理是基于PCR技术扩增基因组DNA限制性片段，基因组DNA用限制性内切酶切割，然后将双链接头连接到DNA片段的末端。AFLP技术是一种选择性扩增限制性片段的方法，结合了RFLP和PCR的优点，具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性，并已广泛用于基因鉴定、基因作图、基因表达等方面。但是在进行AFLP分析之前，必需根据基因组中校扩增的DNA片段两端的序列设计或合成相应的引物,另外试剂盒价格昂贵、配套仪器需求及质量要求较高等，大大限制了AFLP分析的广泛应用。 2.RFLP标记技术 RFLP是由Bostein在1980年首先建立并发展起来的一种分子遗传标记，是不同遗传背景材料DNA碱基序列差异的表现。它是指用限制性内切酶切割不同个体基因组DNA后，含有同源序列的酶切片段在长度上的差异,这种差异可通过用特定的探针进行分子杂交，然后放射自显影而显示出来。RFLP分子标记的特点：共显性；丰富性；无上位性与稳定性。常用的探针来自于对单拷贝或低拷贝的基因组DNA的随机克隆或cDNA克隆。该分子标记技术为分析作物复杂的遗传背景及基因定位提供了技术上的可行性。 3.RAPD标记技术 1971年Kkorana等提出多聚链式反应(PCR)的基本概念后，1985年Saiki等阐述了具体原理和作法，并在1988年从细菌中发现了热稳定性的TaqDNA聚合酶，从而实现了PCR反应的自动化。在PCR技术的基础上，Williams(1990)年采用随机核苷酸序列为引物扩增基因组DNA的随机片段，从而产生一种新的分子标记，即随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphismic DNA),简称RAPD。RAPD是以10bp左右的随机寡核苷酸单引物，对基因组DNA进行扩增，扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色来检测。也可对扩增产物进行同位素标记，用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后用放射自显影检测。 4.SSR标记技术 SSR标记是指由1-6个碱基组成的基本序列串联重复组成的短片段,是建立在PCR反应基础上的共显性标记。SSR的产生是在DNA复制或修复过程中DNA滑动和错配或者有丝分裂、减数分裂时姊妹染色单体分配不均等交换的结果。不同遗传材料重复次数的可变性，导致了SSR长度的高度变异性，这一变异性正是SSR标记产生的基础。微卫星的突变率很高，从而产生了很多的等位基因,导致了微卫星的高度多态性。尽管微卫星DNA分布于整个基因组的不同位置，但其两端序列是保守的单拷贝序列。据此可以设计一对特异引物，对基因DNA进行PCR扩增,将扩增产物在高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶上进行电泳分离，从而检测出DNA的多态性，即检测出不同个体在每个微卫星座位上遗传结构的差别。 应用的研究进展 1.AFLP标记技术的研究进展 AFLP技术能在较短的时间内提供大量的信息，AFLP标记成为芸薹属作物遗传多样性和遗传关系研究中重要的工具