COX—2和HIF—1α在皮肤癌中的表达及与血管生成的关系.docVIP

PAGE PAGE 1 COX—2和HIF—1α在皮肤癌中的表达及与血管生成的关系 　　[摘要]目的探讨COX-2和HIF-1α在皮肤癌中的表达及与血管生成的关系。方法选择手术切除的皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌标本40例为研究材料，另因整形或美容而切下的正常皮肤30例作为对照。采用免疫组织化学的方法检测皮肤癌组织中和正常皮肤组织中COX-2和HIF-1α，并探讨其与肿瘤分化程度以及肿瘤血管生成之间的关系。结果COX-2和HIF-1α在皮肤癌中的阳性表达率显著高于正常皮肤组织，而在SCC中的表达也显著高于BCC中的表达（P0.01）。SCC中平均MVD值为43.1±6.3，BCC中MVD值为24.3±5.8，两组比较，差异有统计学意义（P0.05）。COX-2和HIF-1α阳性表达的组织中MVD显著高于阴性表达的组织（P0.01）。结论皮肤癌中COX-2和HIF-1α在鳞状细胞癌和基底细胞癌中均为高表达，且阳性表达的组织中微血管密度显著高于阴性表达的组织。 　　[关键词]皮肤癌；COX-2；HIF-1α 　　[中图分类号]R739.5[文献标识码]B[文章编号]1673-9701（2013）10-0035-03 　　常见的非黑色性皮肤癌包括皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌，在我国主要以鳞状细胞癌多见。皮肤癌的发生发展是多基因参与的过程，癌基因的突变、凋亡调控基因的异常、抑癌基因的失活等都参与了肿瘤的发生和发展。肿瘤细胞的异常增殖需要充足的血供，有大量的研究证实，肿瘤组织的血供丰富。而环氧化酶-2（COX-2）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在肿瘤血管生成过程中发挥重要的作用[1，2]。本文通过检测皮肤癌组织和正常皮肤组织中COX-2和HIF-1α的表达，探讨其在皮肤癌中的表达水平，并分析其与血管生成之间的关系。现将结果报道如下。 　　1资料与方法 　　1.1临床资料 　　选择皮肤癌手术切除标本40例作为研究对象。其中鳞状细胞癌（SCC）25例，基底细胞癌（BCC）15例，男23例，女17例，年龄35～70岁，平均（56.9±15.8）岁。SCC组男14例，女11例，年龄35～68岁，平均（56.7±21.3）岁；病理分级：Ⅰ级16例，Ⅱ级7例，Ⅲ级2例，Ⅳ级0例，无淋巴结转移的患者。基底细胞癌（BCC）15例，其中男9例，女6例，年龄37～70岁，平均（57.9±19.8）岁；其中早期12例，后期3例。另选择20例整形患者切除的正常皮肤组织为对照组。男12例，女8例，平均年龄（50.7±22.8）岁。三组患者的性别比、平均年龄比较差异无统计学意义。 　　1.2检测方法 　　1.2.1标本制备取病变组织10%甲醛固定，脱水，石蜡包埋，切片，厚度4μm，每例组织切片4张，一张HE染色，其余进行免疫组织化学法进行染色。 　　1.2.2免疫组化检测设阳性对照和阴性对照，阳性对照为试剂公司提供，阴性对照采用PBS代替一抗。石蜡切片脱蜡、梯度酒精水化，PBS缓冲液洗涤，共3次，每次3min，加3%H2O2室温孵育，清除过氧化物酶，甩干后，蒸馏水洗涤3次，每次3min。切片进行抗原修复，然后PBS液进行洗涤，共3次，每次3min。山羊血清封闭后室温下孵育15min，甩去多余的血清，加一抗，分别加抗COX-2多克隆抗体和抗HIF-1α抗体，抗人CD34单克隆抗体，4℃保存过夜，然后PBS液洗涤3次，每次3min。滴加生物素化二抗，室温下孵育15min，PBS缓冲液冲洗3次，每次3min。加三抗，室温下孵育15min，PBS缓冲液洗涤3次，每次3min。加DAB显色剂，显微镜下观察显色情况，显色适度后，自来水冲洗终止显色反应。采用苏木素复染、水洗、分化、脱水、二甲苯透明、封片。 　　1.3结果判定 　　1.3.1COX-2定位于细胞质和核周。染色强度：阴性为0分；1分：色弱，但强于阴性对照者；2分：染色清晰；3分：染色强。分布范围：0分：阳性细胞数无0；1分：阳性细胞50%。0～1分为阴性，2分级以上为阳性。 　　1.3.2HIF-1α细胞核或细胞内出现棕黄色为阳性，每个切片观察5个视野，每个视野观察200个细胞。无着色为0分，1分为着色细胞50%。阴性：0～1分，阳性2～4分。 　　1.3.3肿瘤微血管密度（MVD）CD34标记血管，观察肿瘤内的微小血管和毛细血管。棕色的单个内皮细胞或内皮细胞簇计为1个血管，肌层较厚或者管腔面积8个红细胞直径的血管不计。低倍镜下选择血管密集的3个视野，高倍镜下计数微血管数，3个视野的均数为切片的微血管数。 　　1.4统计学处理 　　数据处理采用SPSS12.0统计学软件进行，计数资料采用χ2检验，计量资料用均数±标准差表示，采用t检验。相关性分析采用Spearman相关性分析。P0.05为差异有统计学意义。