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第七章 基因体外突变技术
第一节 基因定点诱变
一、传统的诱变
利用能够修饰DNA分子的化学或物
理诱变剂处理生物体
射线（紫外线、χ射线、γ射线等）
化学诱变剂（亚硝酸、羟胺、EMS、亚
硝基胍等）
2
不足：
生物体的任何基因都可能发生突变，目
标基因突变率较低，筛选困难
即使获得期望表型的突变体，无法保证
突变确实发生在目标基因上
在基因克隆和核酸测序技术发展之前，
无法知道基因中突变的位置和性质
3
二、基因定点诱变
定点诱变 （site-directed mutagenesis):
在体外特定改变基因的某个特定碱基
▶研究基因的结构与功能的关系
▶获得该基因编码的突变体蛋白质
4
1. 寡核苷酸盒式诱变
Cassette mutagenesis
利用一段人工合成的具有突变序列
的寡核苷酸片段，即寡核苷酸盒，取代
野生型基因中的相应序列
5
6
野生型DNA
人工合成的寡核苷酸片段
HindIII EcoRI
HindIII
移走小片段
EcoRI
退火
HindIII EcoRI
突变体序列
HindIII EcoRI
DNA连接酶
突变DNA
野生型DNA
野生型DNA
HindIII EcoRI
7
2. 基于单链DNA模板的诱变
①基本原理：
使用化学合成的含有突变核苷酸的
寡核苷酸片段作为引物，启动单链
DNA分子进行复制，随后这段寡核苷
酸引物便成为了新合成DNA子链的一
个组成部分，因此所产生出来的新链便
具有已发生突变的碱基序列.
8
9
10
作为诱变剂的寡核苷酸序列：
人工合成一段8~18个碱基的寡核苷酸
序列，该序列中除了所需的碱基突变
外，其余的则与目的基因编码链的特定
区段完全互补
错配碱基的位置应设计在寡核苷酸分子
的中央部位
通常
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