酶的分子修饰background研究报告.pptVIP

酶的分子修饰;1.1.酶分子修饰的概念 通过主链的“切割”、“剪接”和侧链基团的“化学修饰”,以改变其结构、性质及生物活性等.这种应用化学方法对酶分子施行种种“手术”的技术 ;或在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团(物质)，特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接，从而改变酶的结构和性质。 ;生物体中存在的酶分子修饰 ; 酶分子中的某些基团在其他酶的催化下，可共价结合或脱去，引起酶分子构象改变而调节其活性，此类酶称为共价修饰调节酶。;酶的共价修饰方式;磷酸化/去磷酸化是是高等动植物酶化学修饰的主要形式 细菌主要是核苷酰化形式。;;1.2. 酶分子修饰的目的 ;基础酶学研究上 ;人为地改变天然酶的一些性质,创造天然酶所不具备的某些优良特性甚至创造出新的活性,来扩大酶的应用领域。;2. 酶分子的修饰方法;2.1.酶辅因子的置换修饰;置换修饰过程;等价同荷置换;举例 ;2.2.大分子结合修饰;大分子的非共价修饰;能与酶非共价地相互作用而有效地保护酶，既能通过氢键固定在酶分子表面，也能通氢键有效地与外部水相连，通过调节酶的微环境，保护酶的活力。 有些来自嗜热菌的酶具有较高稳定性，其原因正是由于保护性大分子(如肽和聚胺)发挥作用的结果。 ; 酶的多聚体或酶聚合体的活力和稳定性比单体高就是这个原因。 用抗体来稳定酶。有些抗体能在蛋白质开始伸展的部位或被蛋白酶水解的部位起作用，因而起到稳定作用。;α -淀粉酶与其抗体的复合物在70℃半衰期为16h，而天然酶仅为5min。 抗体保护的酶还有抗氧化酶、抗有机溶剂、抗低pH、抗自溶、抗蛋白酶等作用。 Taqase;ANNEALING 37°C - 65°C;优点： 抗体制备简单 任何一种酶都有它相对应的抗体，制备亦较简单、迅速。所以，用抗体稳定酶的方法较普遍。;缺点： 制备抗体花费较多，解决的办法是用微生物来生产。最近报告表明，已经成功地由大肠杆菌生产具有完整功能的重组抗体片段，而且用同一种微生物既能生产目的蛋白又生产其抗体的可能性。 在医学上要解决酶—抗体复合物在体内的抗原性。目前采用降低抗体分子的大小制造嵌合抗体 ;大分子的共价修饰;聚乙二醇修饰超氧物歧化酶(SOD)，不仅可以降低或消除酶的抗原性，而且提高了抗蛋白酶的能力，延长了酶在体内的半衰期，从而提高了酶药效。 日本学者将聚乙二醇连到脂肪酶、胰凝乳蛋白酶上所得产物溶于有机溶剂，在有机溶剂存在下能够有效地起作用。 嗜热菌蛋白酶在水介质中通常催化肽链断裂，但用聚乙二醇共价修饰后，其催化活性显著改变，在有机溶剂中催化肽键合成，已用于制造合成甜味剂。;PEG: HO-CH2-CH2-(OCH2CH2)nCH2CH2-OH;;PEG binds 2-3 water molecules per repeat unit PEG/water ‘shield’ can reduce activity of protein, but generally the increased circulation time makes up for this;PEGylated microspheres:;Block copolymer localizes at aqueous/polymer interfaces;?? Unmodified PLGA particles t1/2 = 13.6 min. ?? PEG block copolymer particles t1/2 = 270 min (4.5 hr) ?? Altered biodistribution: high blood availability and reduced spleen/liver uptake No PLGA particles remaining in blood after 12 hrs;重组白介素（rIL-2）用大分子PEG修饰后，半衰期延长10倍;天冬酰胺酶（ASP） 用于白血病的治疗 PEG修饰后半衰期从24小时增加到357小时 FDA1994年批准用于急性淋巴细胞性白血病治疗;;Protein-Polymer Bioconjugates;Disadvantages of IFN treatment;Pegylated IFNa;Peg interferon alfa-2a;Peg-IFN ?-2a blood levels do not fluctuate;粒细胞集落刺激因子（G-CSF） 用于治疗中性粒细胞减少症 美国Amgen公司研制的PEG修饰长效G-CSF，是在重组人G-CSF的N端Met残基上共价结合了20kD的PEG，于2002年1月获FDA批准;酶;Characteriza