Westernblot实验技术讲义.pptVIP

定义：;Western Blot基本原理;Western Blot一般流程;蛋白样品的制备;裂解液;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳;丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺 ?? SDS 配胶的Tris缓冲液 TEMED 过硫酸铵(时间) Tris-甘氨酸电泳缓冲液 ;凝胶浓度与蛋白分离范围;安装玻璃板;转膜;转膜;不能有气泡 不要污染膜的表面 注意正负极 冰浴冷却;半干转;封闭;一抗、二抗孵育;二抗与底物反应显色;Western Blot常见问题分析;SDS电泳;条带比正常的窄？ “微笑”或“倒微笑”条带？;转膜及抗体检测;背景太高;没有阳性条带或比较弱;弥散性条带或非特异性条带;Enjoy Experiment,Enjoy Life