2基因工程的酶学基础.ppt

2 基因工程的酶学基础 第一节 限制性核酸内切酶 1. 来源 （2）修饰（Modification） （3）限制与修饰系统相关的三个基因 二、限制性内切酶的命名 三、限制性内切酶的类型 1. Ⅰ型限制性内切酶的基本特性 （2）切割位点 I型酶：限制修饰系统酶 异源多聚体，R、M、S分别为限制性内切酶、甲基化酶、特异位点识别的活性。 识别序列全甲基化-不识别 识别序列半甲基化-甲基化作用 识别序列未甲基化-限制性内切酶作用 识别序列与切割位点不一致，且切割位点随机不定 ATP、Mg2+和SAM（S-腺苷甲硫氨酸） 2. Ⅲ型限制性内切酶 2. Ⅱ类限制性内切酶的基本特性 （2）切割位点 （3）Ⅱ型限制性内切酶不具有甲基化功能 （4） II型限制性内切酶对单链DNA的切割 核酸限制性内切酶的类型及主要特性 四、限制性内切酶酶解反应条件 2. 酶解过程 配酶解体系 混匀 反应终止 酶解结果鉴定 ① 酶解体系 ② 混匀 ③反应终止 ④ 酶解结果鉴定 酶切后发现除了目的DNA条带外，还有其它条带 酶存在“星号”活性，造成非特异性切割； 不正确的操作，导致其它内切酶污染； 底物DNA中可能存在其它DNA污染。 （1）内切酶与识别序列的结合模式 （4） 几种常用限制酶识别位点 ① 大多数厂家供应的限制内切酶为浓缩液 ④ 酶分装成小份，避免反复冻融