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发酵技术资料汇编之消毒灭菌篇 消毒与灭菌 人们通过消毒、灭菌、防腐和无菌等手段，以达到控制、消灭有害微生物的目的。1、概念① 灭菌（sterilization） 灭菌是利用理化方法，杀死物体或介质中的所有微生物，包括致病的和费致病的各种微生物，以及细菌的繁殖体和孢芽。灭菌后的物品即成无菌状态。灭菌适用于必须无任何微生物存在的物品，如注射液、静脉输入用液体和外科手术器械、培养基等。② 消毒（disinfection） 消毒是利用理化方法，杀死物体或介质中的病原微生物，但不一定能杀死细菌的芽孢和某些抵抗力强的非病原微生物。通过消毒可以达到防止病原微生物传播的目的。具有消毒作用的药品，称为消毒剂（disinfectant）。③ 防腐（antisepsis） 亦称抑菌，是指抑制微生物的生长繁殖，一般用于保存药品、食品、生物制品等。用于防腐的药物称为防腐剂（antiseptic agent）。有些防腐剂在增加浓度或延长作用时间时，则具有杀菌作用。④ 无菌（asepsis） 是没有活菌存在的意思，防止微生物进入机体或物体的方法，称为无菌操作。无菌操作所用的器具和材料，事先都要经灭菌处理。2、物理消毒、灭菌的方法（1） 热力灭菌。又分为干热灭菌和湿热灭菌法，在同一温度下湿热灭菌比干热灭菌效果好，这是因为：蒸汽的穿透力比干热空气强；微生物蛋白吸收水分后，比干热状态下更易于变性和凝固；蒸汽与物体表面接触后，凝固成水并放出潜热，使被灭菌的物品温度迅速提高，加快生物的死亡。 （2） 低温 低温不能灭菌，但仅能抑制其生长。冷冻和融化交替使用，对于细菌细胞则具有更大的破坏力。（3） 辐射（4） 过滤除菌是用滤器，机械地滤去液体或空气中的细菌的方法。滤过除菌只用于不耐热、也不能以化学方法处理的液体或气体，如抗生素、维生素、抗霉素、血清、酶的溶液等。（5） 干燥 微生物在干燥情况下，能停止生长繁殖。（6） 超声波 发酵罐染菌问题！ 发酵过程中染菌的检查判断○杂菌的检查方法 目前生产上常用的检查方法有：①显微镜检查；②平板划线检查；③肉汤培养检查。判断发酵是否染菌应以无菌试验结果为根据。无菌试验的目的：（1）监测培养基、发酵罐及附属设备灭菌是否彻底（2）监测发酵过程中是否有杂菌从外界侵入（3）了解整个生产过程中是否存在染菌的隐患和死角（4）为制服污染提供依据。 ○各种检查方法的比较3种方法各有优缺点，显微镜检查方法简便、快速，能及时发现杂菌，需要细致的观察。但由于镜捡取样少，视野的观察面小，不易发现早期染菌。平板划线法的缺点是需经较长时间培养才能判断，且操作较繁琐，但它能比显微镜捡出更少的杂菌。 ○杂菌检查中的问题 1，酚红肉汤和平板划线培养样品应保存至放罐后12小时，确定为无菌时方可弃去2，取样时要有防止外界杂菌混入的措施 发酵罐染菌问题！ ○不同染菌途径对发酵的影响1、种子带菌。2、空气系统带菌。3、培养基或设备灭菌不彻底。4、设备渗漏。5、接种操作和取样操作导致染菌。 ○染菌对产物提取和产品质量的影响1、对过滤的影响： 发酵液的粘度加大，发酵不彻底，基质残留浓度大，这些造成过滤时间长和收率降低。2，对提取的影响（1）有机溶剂萃取：染菌的发酵液含有更多的水溶性蛋白质，易发生乳化，使水相和溶剂相难以分开（2）离子交换工艺：杂菌易粘附在离子交换树脂表面或被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树脂的交换量3，对产品质量的影响（1）对内在质量的影响：染菌的发酵液含有较多的蛋白质和其它杂质，对产品的纯度有较大影响。另外杂菌可能产生不易处理的毒素，严重影响产品药品质量。（2）对产品外观的影响：一些染菌的发酵液经处理过滤后得到澄清的发酵液，放置后会出现混浊，影响产品的外观。 发酵罐染菌问题！ 染菌原因分析 （1）大批发酵罐染菌如果整个工厂几个发酵罐都出现染菌现象而且染的是同一种菌，一般来说，这种情况应该公用的管道出了问题，如移种管道，补料系统，种子系统等。这种大批发酵罐染菌的现象较少但危害极大。所以必须对公用系统定期进行检查。（2）个别发酵罐连续染菌和偶然染菌个别发酵罐连续染菌大多是由空气系统造成的，也有一些是设备问题：如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损，特别是冷却管的不易觉察的穿孔等。个别发酵罐的偶然染菌其原因比较复杂，因为各种染菌途径都可能引起。 （3） 发酵早期染菌，一般认为除了种子带菌外，还有培养液灭菌或设备灭菌不彻底所致，而中、后期染菌则与这些原因的关系较少，而与中间补料、设备渗漏以及操作不合理等有关。 （4）杂菌的类型也是判断染菌原因的重要依据之一。 一般认为，污染耐热性芽抱杆菌多数是由于设备存在死角或培养液灭菌不彻底所致。污染球菌、酵母等可能是从蒸汽的冷凝水或空气中带来的。在