第12章荧光分析法-公开课件（精选）.pptVIP

第一节 荧光分析法的基本原理 一、分子荧光 （一）分子荧光的产生 （二）荧光的激发光谱和发射光谱 二、荧光与分子结构 三、影响荧光强度的外部因素 第二节 荧光定量分析方法 一、荧光强度与物质浓度的关系 溶液的荧光强度 该溶液中荧光物质吸收光能的程度 荧光效率 第三节 荧光分光光度计和荧光分析新技术 一、荧光分光光度计 滤光片荧光计：激发滤光片让激发光通过；发射滤光片常用截止滤光片，截去所有的激发光和散射光，只允许试样的荧光通过，不能测定光谱，只用于定量分析。 滤光片-单色器荧光计：将发射滤光片用光栅代替，不能测定激发光谱，可测定荧光光谱。 荧光分光光度计：两个滤光片都用光栅取代，可绘制激发光谱和荧光光谱。 3、酸度： 荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的酸度对其荧光强度有较大影响，因为在不同酸度中分子和离子间的平衡改变，因此荧光强度也有差异。 如苯胺：在pH7-12溶液中主要以分子形式存在，发生蓝色荧光；pH2或pH13的溶液中均以离子形式存在，不发射荧光。 4、荧光熄灭剂： 荧光熄灭：荧光猝灭，指荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。 荧光熄灭剂：引起荧光熄灭的物质，如卤素离子、重金属离子、氧分子以及硝基化合物、重氮化合物、羰基和羧基化合物。 作用机制： 1）荧光物质分子和熄灭剂分子碰撞而损失能量； 2）荧光物质分子与熄灭剂分子作用生成了本身不发光的配位化合物； 3）溶解氧的存在，使荧光物质氧化，或是由于氧分子的顺磁性，促进体系间跨越，激发单重态的荧光分子转变至三重态； 4）浓度较大（超过1g/L）时，发生自熄灭现象。 荧光熄灭法（fluorescence quenching method）：荧光物质在加入某种熄灭剂后，荧光强度的减弱和荧光熄灭剂的浓度呈线性关系，利用这一性质测定荧光熄灭剂的含量的方法。 5、散射光： 一束平行单色光照射在液体样品上时，大部分光线透过溶液，小部分由于光子和物质分子相碰撞，使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射，这种光称为散射光。 瑞利光：仅运动方向改变，无能量交换。 拉曼光：运动方向改变，并有能量交换，波长较入射光稍长或稍短。 对荧光测定干扰的主要是波长比入射光波长更长的拉曼光。 消除：选择适当的激发波长。 6、其它 内滤光作用：溶液中含有能吸收激发光或荧光物质发射的荧光的物质，就会使荧光减弱，这种现象称为内滤光作用，如色胺酸中的重铬酸钾。 自吸收现象：化合物的荧光发射光谱的短波长端与其吸收光谱的长波长端重叠，产生自吸收，如蒽化合物。 条件：极稀溶液 二、定量分析方法 1、校正曲线法： 以荧光强度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标。 2、比例法： 在线性范围内，测定标样和试样荧光强度，对比。 3、联立方程式法： 用于多组分混合物的荧光分析。 * * * * 第十二章荧光分析法 光致发光：物质受到光照射时，除吸收某种波长的光之外还会发射出比原来所吸收的波长更长的光，这种现象称为光致发光。 荧光：物质分子接受光子能量被激发后，从激发态的最低振动能级返回基态时发射出的光。 荧光分析法：根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。 特点： 1）灵敏度高 2）选择性好 3）方法简单快速，用样量少 4）应用受限 一、分子荧光 （一）分子荧光的产生 1、分子的电子能级与激发过程 基态+hv→激发态 光谱中电子能级可分为二组： 1）电子自旋配对的（电子自旋方向相反，电子的净自旋S=0，谱线多重性M=2S+1=1）称为单重态或单线态，以S表示。 2）电子自旋非配对的（电子自旋方向相同，其净自旋S=1，谱线多重性M=3）称为三重态或三线态，以T表示。 激发单重态与相应的三重态的区别在于电子自旋方向不同及三重态的能级稍低一些。 三重态寿命较长。 2、荧光的产生 基态 光辐射 激发态 基态 释放能量 振动弛豫（vibrational relexation） 处于激发态各振动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞，能量传递给溶剂分子，电子返回到同一电子激发态的最低振动能级。 特点：无辐射跃迁；只能在同一电子能级内进行；时间约为10-12s；使大多数电子激发态处于其最低振动能级上。 内部能量转换（internal conversion）：内转换 两个电子激发态之间的能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子能级的过程。 特点：无辐射跃迁；两个电子激发态具有相同的多重性（都是单重态或都是三重态，如S2*