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如何进行IVF实验室的质控 广东医学2010年10月第31卷第l9期GuangdongMedicalJournalOct.2010,Vo1.31,No.19 如何进行IVF实验室的质控 刘东云,韩伟,黄国宁 重庆市妇幼保健院生殖与遗传研究所(400013) 体外受精与胚胎移植(invitrofertilizationandembryo transfer,IVF—ET)是治疗不育症的有效手段,IVF实验室是 其中极为重要的部分,对IVF结局有重要影响.在体内,配 子和胚胎处于一个无光,恒温,恒湿,低氧的环境,母体内分 泌及子宫/输卵管内分泌环境极其复杂,配子/胚胎在受到母 体自身保护的环境下生长发育.但在体外,配子/胚胎自身 不具备任何屏障和保护功能,可能暴露于含有害气体的空气 中,面临温度,渗透压,pH等变化的应激,削弱胚胎的发育潜 能.严格的实验室质量控制(qualitycontrol,Qc)与质量保 障(qualityassurance,QA)系统为配子和胚胎的生长发育提 供了相对稳定的场所,建立稳定,可靠的IVF实验室对于维 持IVF成功率具有重要作用.质量控制系统包括质量控制 和质量保障,已常规用于临床诊断检验实验室日常工作,在 IVF—ET中全世界范围内也逐步引进了质量控制系统,以确 保实验室操作的稳定性及最大限度地维持胚胎发育潜能,以 及获得最好的胚胎质量和最高的妊娠率. 1IVF实验室的质量控制 IVF实验室质量控制包括两方面:一是严格的操作制度 及管理制度,避免因不恰当操作而造成失误,二是对接触配 子和胚胎的耗材,培养基进行质控实验,以决定是否采纳这 些耗材及培养基.IVF实验室的QC系统不仅确保结果的稳 定性,而且可以追踪实验室操作事件…. 1.1质量控制制度IVF实验室作为操作人类配子/胚胎 的空间具有其自身的特殊性,工作人员应明确地被告知哪些 必须做,哪些禁止做.例如必须做到以下事项:进入培 养室的人员必须严格遵守培养室规章制度;每天工作前半小 时开启超净工作台,热台,热板,空气净化设备并测试所有培 养箱的CO,浓度,温度,操作台面和热板的温度;每天记录实 验室内外的温度,湿度,包括天气情况;记录实验室内外出现 的异常情况,包括异常味道,装修,大范围消毒,毒气泄漏事 件等;每天上下班时检查培养箱运行状况及气体供应情况, 及时更换气瓶;每天工作结束时关闭所有照明灯,操作台,显 微镜,热板,烤箱,电脑等电器的电源;精液接收,处理,采卵, 授精,移植,冷冻,解冻等对配子/胚胎操作必须由2名实验 室人员核对并签名;配子/胚胎冷冻和解冻须严格编号和记 录,双人核对患者夫妇姓名,储存位置,冷冻时间,胚胎期,胚 胎数目,冷冻管数等.禁止做以下事项:禁止在同一操作区 内同时处理2例或2例以上患者的配子/胚胎;禁止不同患 者的配子/胚胎使用同一支吸管操作;禁止同时交接或处理 2份或2份以上的标本,发现患者身份可疑,或标本混乱,必 须立即停止操作,核实身份,混乱的标本,用品一律废弃;禁 止将对胚胎有毒的化学物质和放射源带进胚胎实验室;未经 患者本人同意,禁止使用其配子或胚胎进行科学研究;禁止 无医学指征的性别选择. 1.2质量控制实验鼠胚实验(mouseembryoassay,MEA) 是目前最常用于实验室耗材,培养基和设备质量控制的生物 方法.MEA方法不同检测的效率也不同.单细胞鼠胚对培 养环境毒素更灵敏.鼠系也可能影响检测敏感性,远亲杂交 鼠胚胎在特定培养基中可能停滞于2细胞期,所以近亲杂交 鼠胚更敏感.是否添加氨基酸和白蛋白也可能影响MEA的 敏感性,因为它们可以螯舍毒素从而降低鼠胚对检测物质的 敏感性.所以理想的MEA方法…是使用近亲杂交鼠从舍子 期开始,在不含氨基酸的简单培养基加白蛋白中培养,从合 子期培养到2细胞期,然后在不合白蛋白的简单培养基中继 续培养至囊胚期以防止掩盖毒素的存在,检测通过标准由各 实验室自己规定,一般以80%或90%以上囊胚形成率为标 准.MEA适用于新建或新启动周期的ⅣF实验室质控. 除MEA外,可通过培养24,78,96h动态观察胚胎形态, 了解囊胚发育,形态差异及延迟,细胞数,细胞分布(内细胞 团和滋养外胚层)和出生率,这些都是实验室质控最有效的 数据,这些数据不仅反映胚胎发育的情况,而且反映囊胚的 存活潜能. 精子存活率实验具有简单,易操作的优点,由于鼠与人 的种属差异,MEA不宜在IVF实验室常规开展,精子存活实 验则作为常用的质控实验.正常人精液上游法分离所需精 子,调节活精子密度为5×10.?mL-.,置5%CO,37℃培养 箱培养72—120h,计算生存指数(生存指数=测试组活精子 数/对照组活精子数×100%),生存指数gt;70%实验有意义, 85%为合格.120h精