蔗糖酶的分离提纯及酶促培训讲学.pptVIP

蔗糖酶的分离提纯及酶促反应动力学实验 ; 内容提示 ; 一、目的要求 ; 二、实验原理;Date;Date;4、Folin-酚法测定蛋白质含量的原理： 1）凡含有两个及两个以上肽键（—CO—NH—）的化合物（如双缩脲：H2N—CO—NH—CO—NH2），在碱性溶液中（如Folin-甲试剂）都能与Cu2+作用，形成紫色的复合物； 2）蛋白质是由多个氨基酸通过肽键连接起来的，故所有的蛋白质均可与Folin-甲试剂反应，形成紫色的铜-蛋白质复合物； 3）铜-蛋白质复合物在pH=10的碱性溶液中可将磷钼酸-磷钨酸（Folin-乙试剂）还原成兰色的钼蓝和钨蓝混合物，其颜色的深浅（在一定范围内）与蛋白质的含量成正比； 在测定液体蛋白质样品含量的常用方法中（双缩脲法、 Folin-酚法和紫外吸收法），Folin-酚法的灵敏度最高（比紫外吸收法高10-20倍，比双缩脲法高100倍），所以我们选用本方法。;5、有机溶剂分级沉淀的原理： 有机溶剂分级是利用不同Pr在不同浓度的有机溶剂中溶解度的差异分离酶蛋白的一种方法。 其原理是： 1）有机溶剂能降低溶液的介电常数，增加Pr分子上不同 电荷的引力，使蛋白质的溶解度下降； 2）有机溶剂