甲醛对DNA损伤的彗星实验研究.pdfVIP

第37卷第4期 实验生物学报 V01．37．No．4 20104 2004年8月 Acta Sinica Augl】st Bi0109iaeExperimentalis 甲醛对DNA损伤的彗星实验研究水 李 睿鲁志松乔琰姚汉超 于非非 杨 旭” (华中师范大学生命科学学院，武汉430079) 摘要 甲醛是一种遗传毒性物质。国内外学者的大量研究证实，甲醛可以引起DNA—DNA、DNA一蛋 白质分子交联，但对于甲醛是否能够引起DNA分子的断裂，学界却存在分歧。本实验以颊黏膜细胞 作为实验材料，通过彗星实验对甲醛的遗传毒性——尤其是DNA分子断裂作用进行了系统的研 断裂作用的断裂峰值(7．5斗mol／L)。 关键词：甲醛遗传毒性颊黏膜细胞彗星实验断裂峰值 当前室内空气污染对人体健康的危害是环境 彗星实验，也称单细胞凝胶电泳技术(Single 科学研究的热点。甲醛作为一种常见的装修型化学 CellGel 性室内空气污染物，以其来源广、水平高、持续时间 兴起的一种在单个细胞水平检验DNA分子的断 长、毒性大等特点受到人们的广泛关注。高浓度甲 裂，损伤和修复的方法【5】。在该实验中，裂解液破坏 醛是一种遗传毒性物质，美国职业卫生阈限值中将 细胞膜结构，使胞内成分扩散到其中，而DNA由于 甲醛列为2A类化合物——可疑人类致癌物(sus—相对质量较大留在凝胶中。碱性条件下，DNA解螺 human pected carcinogen)。大量关于各种终点效应旋，其断链释放出来，在电场中朝同一方向移动， 的实验显示，甲醛对于细菌和动物细胞都具有一定 DNA损伤越严重断链迁移率越大，从而形成彗星状 的遗传毒性”】。不同浓度的甲醛可以诱导多种种类 影像。近年来，它也被广泛地应用于DNA—DNA、 的细胞产生突变，这种突变可能是点突变，也可能 DNA一蛋白质分子交联的检测。其原理是，通过交联 是大段DNA片段的改变，包括染色体的断裂，姐妹 作用使DNA的分子碎片附着在一起，从而使之在 染色单体的交换，DNA—DNA、DNA一蛋白质分子交电场的作用下迁移率减小。该方法较传统的交联检 联等。其中交联作用可以引起复制的错误而导致突 测方法更快捷，更灵敏。 变，因此学者们将DNA-DNA、DNA．蛋白质交联作 本实验以甲醛遗传毒性作用的靶细胞一人类 为甲醛潜在突变的分子标志物。甲醛直接介导蛋白 颊黏膜细胞作为实验材料，运用彗星实验作为研究 质的氨基酸残基上的功能基团与DNA分子中的碱 手段，对甲醛的遗传毒性，特别是甲醛使DNA断裂 基共价结合形成DNA一蛋白质交联。它也可以诱发 的作用作了研究，现报道如下： DNA—DNA交联，形成5种交联物：G—G、A—A、A—G、 1 材料和方法 A—C和G—C【2]。氧化损伤可能是甲醛遗传毒性作用的 重要分子机理，传统理论认为甲醛作为强氧化剂直 1．1主要试剂和仪器 接氧化碱基，例如形成8一羟基鸟嘌呤等【3】，氧化损伤 分析纯甲醛(36％一38％水溶液)；吖啶橙(A．O)； 的直接后果是导致碱基分子间的环化和交联，例如 形成亚甲基双腺苷【4】，以致碱基失去配对功能。近年 来，国内外学者对甲醛的遗传毒性进行了广泛研 究，大量的研究结果证实甲醛具有DNA．DNA、 DNA一蛋白质分子的交联作用，但是在甲醛是否具有 ’国家“十五”科技攻关课题(2001BA704801)经费