酵母HO基因在可诱导启动子GAL10.pdf

遗传学报，12(1);1-6,1985 ActaGeneticaSinica 酵母HO基因在可诱导启动子GAL10 控制下的表达 李育 阳 彭秀玲 （复旦大学遗传学研究所，上海） JamesR．Broach 美（国纽约州立大学石溪分校微生物学系） 把一个带有HO基因的HindIII片段插入酵母表达载体 YEP52，使其与载体中的启动子 GAL10顺向连接。HO基因50端经体外缺失操作，得到了能使HO基因的表达受可诱导启动 子GAL10控制的质粒。带有这个质粒的ho菌株在半乳糖的诱导下，可恢复接合型的转换能力。 啤酒酵母 S（accharomycescerevisiae）的单倍体细胞有两种接合型，即a型和a型。在 连续的细胞分裂过程中，两种类型的细胞可以相互转换。酵母细胞接合型的转换有其特 有的性质31〔，这已引起许多分子生物学家的兴趣，因为接合型转换的调控可以作为真核基 因表达控制的一个模型。另外，深人研究酵母接合型转换的性质在实践上还可以指导酵 母多倍体良种的选育。 酵母细胞如何实现接合型的转换？现在公认的有所谓盒式模型 (Cassettemodel)：位 于酵母第III染色体的左臂和右臂各有一个接合型座位，即HML和HMR，在正常情况下 它们处于不表达状态，真正决定接合型的是位于染色体中间的座位MAT。这三个座位都 有可决定接合型的结构，被称为盒 C（assette)，相应于两种接合型有两种盒：a盒和a盒， 位于HML和HMR的盒可以转座到MAT中。如果它饥所带的盒不同，转座的鳍菜就会 改变MAT中的盒型，其结果也就改变了细胞的接合型。这是实现接合型转换的结构基 础。最近的一些研究表明，在接合型的转换过程中，若干染色体基因的作用是必不可少的． 其中研究得最多的是HO基因。如果能克隆HO基因，并使其表达处在可控制的条件之 下，这对研究接合型转换的机制是很有用的。 Jensen和 Herskowitz已经克隆了HO基因97〔，我们亦利用启动子 GAL10表达了酵 母质粒2p编码的基因REF1L21。启动子 GALI0是一个可诱导的启动子。本工作试图 把HO基因的表达处于启动子 GAL10的控制下，其目的在于建立可以在同一菌株比较 HO和ho状态下细胞内的变化的条件，以进一步了解HO基因在接合型转换中的作用。 材 料 与 方 法 一（）菌株 本文于 1983年 10月13日收到。 2 遗 传 字 报 12卷 HO基因克隆的受体菌 ho27B。oaa0aade8leu2his4gall) 接合型试验菌 DC14(ahisl),DC17(ahisl) C600(YEP51） 含有杂种质粒 YEP51的 C600转化子。 质粒 YEP51包括 GAL10启动子片段，酵母质粒2Ic及大肠杆菌质粒 ColE1的复制起始区，因此能在酵母 及大肠杆菌内进行复制。另外，还包括可供选择的标记LEU2基因及Apr基因。 二（）培养基 YEPD 0.5外酵母抽提物，1多蛋白陈，2务葡萄糖。 SD-leu 葡（萄糖） 0.67%YNB (YeastNitrogenBase)，补加除亮氨酸外的氨基 酸，2%葡萄糖。 SD-leu 半（乳糖，棉子糖） 0.67外 YNB，补加除亮氨酸外的氨基酸，2%半乳糖， 2fo棉子糖。 SD 葡（萄糖） 0.67外 YNB，2外 葡萄糖。 SD 半（乳糖，棉子糖） 0.67务 YNB,2呢 半乳糖，2％棉子糖。 （三）酶及酶反应 限制性内切酶为 BRL产品，反应按产品要求的条件进行。 Klenow填补反应 反应体积为 100微升，DNA量为2微克，加 Klenow片段3单 位，反应液中含0.5MTris(pH7.4),50mMMCg,,l 100mM,8-琉基乙醇，80IcM dNTPa 反应在 150C进行2小时。