选修三 1.1DNA重组技术的基本工具.ppt

要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶 切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来 切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏 性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的 DNA分子了。 1.下列关于限制酶的说法正确的是 A．限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少 B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C．不同的限制酶切割 DNA 后都会形成黏性末端 D．限制酶的作用部位是特定的核苷酸形成的氢键 B 2.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的 DNA 片断时，需使用 A．同种限制酶 B．两种限制酶 C．同种 DNA 连接酶 D．两种 DNA 连接酶 A 3.下列四条DNA片段，可能是由同一种限制酶切割而成的是 A．①②　　　　　　　　　 B．②③ C．③④ D．②④ D DNA连接酶 连接酶的作用：将互补配对的两个黏性末端或平末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 基因进行了切割以后就有了切口， 怎样才能将有切口的基因与其他基因缝合在一起呢？ 积极思考 （二）DNA连接酶 分子缝合针 磷酸二酯键 G A A T T C C T T A A G G P A P 把两条双链DNA片段之间的缝隙“缝合”起来。即将脱氧核糖和磷酸连接起来. 要实现目的基因与载体的连接则在对其切割时应选用 限制酶。 1、作用： 作用原理 催化磷酸二酯键形成 2、作用部位： 3、分类 E·coli DNA连接酶　　　　或T4DNA连接酶 根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类： 同一种 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 类型 来源 功能 相同点 差别 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复磷 酸二酯 键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端(效率较低) 作用 应用 限制性核 酸内切酶 DNA 连接酶 DNA连接酶与限制酶的比较 (1)区别： (2)两者的关系可表示为： 使特定部位的磷酸二酯键断裂 用于提取目的基因和切割载体 在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键 用于目的基因和载体的连接 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 DNA连接酶的缝合作用 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！ E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 由于氢键是分子间作用力，其断裂与重新形成均以限制酶和DNA连接酶无关。 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 DNA连接酶的缝合作用 A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶的作用 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 作用对象 作用结果 用途 都能催化两个核苷酸之间形成磷酸二酯键 都是蛋白质，但组成和性质不同 不需要 需要 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键(用于基因工程操作) 将单个核苷酸加到已存在的DNA片段的 3′端的羟基上，形成磷酸二酯键(用于 DNA 的复制) 将存在的 DNA 片段连接成完整重组 DNA 分子 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。 （1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 （2）请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 （3）在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？ 可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的） （三）基因进入受体细胞的载体 分子运输车 具备哪些条件才能充当“分子运输车”？ A、具有多个限制酶切割位点，以便外源基因插入其中； B、具有特殊的标记基因，便于鉴定和选择。 C、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； D、对受体细胞无害 2、载体的