非天然氨基酸修饰蛋白质研究进展.docxVIP

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－２３２Ｘ．２０１３．０５．０１１ 非天然氨基酸修饰蛋白质研究进展 杜 方 川１，２，王 芬１，３，神 应 强１，２，陈 灿 玉１，王 安 明１ （１．杭州师范大学生物医药与健康研究中心 ，浙 江 杭 州 ３１１１２１；２．杭州师范大学生命与环境科学学院 ，浙 江 杭 州 ３１００３６； ３．杭州师范大学材料与化学化工学院 ，浙 江 杭 州 ３１００３６） 摘 要 ：蛋白质修饰是改善其物理化学和生 物学特性的一种重要方法 ，目前已成为生物技术 、生 物 催 化 和 生物医学领域的研究热点 ．非天然氨基酸在蛋白质修饰中表现突出 ．介绍了非天然氨基酸种类 及 修 饰 方 法 ，概 述 了 其 应 用 领 域 ，以期为扩大利用此方法者提供参考 ． 关 键 词 ：生 物 正 交 反 应 ；蛋 白 质 修 饰 ；非 天 然 氨 基 酸 ；密 码 子 扩 展 中 图 分 类 号 ：Ｏ６２９．７；Ｑ５１ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１６７４－２３２Ｘ（２０１３）０５－０４３７－０９ 蛋 白 质 仅 仅 用 ２０种天 然 氨基酸执行了一系列显 著 功 能 ，仅 有 的 ２０ 种 天 然 氨 基 酸 携 有 的 功 能 基 团 数 量 有 限 ，无 法 满 足 化 学 、生物科学研究和应用中对 蛋 白 质 结 构 和 功 能 的 需 求 ［１］．目 前 ，通 过 化 学 修 饰 、基 因 定 点突变 和计算机辅助蛋白质设计 ，虽然对蛋白质的结 构 改 造 赋予了天然蛋 白 质 新的 功 能 ［２］，但 这 些 方 法 都 依 赖 于 ２０种 天 然 氨 基 酸 本 身［３］；其用于修饰改造 的 功 能 基 团 仅 有 巯 基 、羟 基 、羧 基 、氨 基 等 几 种 有 限 基 团 ，功 能 化 方 式 十 分 有 限［４］．与 此 相 反 ，可 人 为 赋 予 多样性功能基团的非天然氨基酸 （ＵｎｎａｔｕｒａｌＡｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，ＵＡＡｓ）在 蛋 白 质 修 饰 中 表 现 突 出［５］，这 些 ＵＡＡｓ含 有 酮 基 、醛 基 、叠 氮 、炔 基 、烯 基 、酰 胺 基 、硝 基 、 磷 酸 根 、磺酸根等多样性功 能 基 团 ，可进行多种修饰反应 ，如 ：点 击 化 学 、光 化 学 、糖 基 化 、荧 光 显 色 等 反 应［６］．通 过 ＵＡＡｓ对蛋白质进行修 饰 给其结 构 和 功 能 的理论 研 究 与 应 用带来 了 新 的契机 ．本 文 回 顾 了 ＵＡＡｓ修 饰 蛋 白 质 研 究 的 最 新 进 展 ，并对密码子扩展法进行详细 介 绍 ． １ ＵＡＡ 种 类 一 系 列 ＵＡＡｓ已 经 被 用 在 细 菌 、酵母和哺乳动物细 胞 中 进 行蛋 白质 修 饰 ，其 精 确 性 和 效 率 非 常 高 ；它 们 大 多 都 是 ２０种 天 然 氨 基 酸 的 衍 生 物 ，现 今 报 道 的 ＵＡＡ 衍 生 物 有 苯 丙 氨 酸 衍 生 物 、酪 氨 酸 衍 生 物 、谷 氨 酰 胺 衍 生 物 、丙 氨 酸 衍 生 物 、半胱氨酸衍生物 、丝 氨 酸 衍 生 物 、赖 氨 酸 衍 生 物 等［７］．部 分 ＵＡＡｓ结 构 如 图 １ 所 示 ． ＵＡＡ 修饰方法与过程 化 学 合 成 法 固相 肽合成方法和 半合成方法相结合能合成出含 ＵＡＡｓ的 大 片 段 蛋 白 质［８］．例 如 ，在 化 学 连 接 中 ，一 ２ ２．１ 收 稿 日 期 ：２０１３－０１－１０ 基 金 项 目 ：国家自然科学基金项目 ；浙江省自然科学基金项目 （ＬＹ１３Ｂ０６０００８）．；博士后特别资助项目 （２０１３Ｔ６０６０６）． 通 信 作 者 ：王 安 明 （１９７５—），男 ，副 研 究 员 ，博 士 ，主要从事生物化工研究 ．Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｍｉｎｇ＠ｈｚｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 杭州师范大学学报 （自 然 科 学 版 ）２０１３年４３８图 １非天然氨基酸结构 Ｆ 杭州师范大学学报 （自 然 科 学 版 ） ２０１３年 ４３８ 图 １ 非天然氨基酸结构 Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｕｎｎａｔｕｒａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓ 个 Ｃ 端 含 α－硫 脂 的 多 肽 将 和 一 个 Ｎ 端含半胱氨酸 的 多 肽 反 应 ，在 经 历 一 个 酰 基 重 排 后 ，硫 脂 键 形 成 一 个 第 ５期杜 方 川 ，等 ：非天然氨基酸 修 饰蛋白质研究进展 ４３９肽 第 ５期 杜 方 川 ，等 ：非天然氨基酸 修 饰蛋白质研究进展 ４３９ 肽 键 将 这 两 个 片 段 连 接 在 一 起［９］．