大弹涂鱼皮肤黏液的抑菌活性和蛋白质组学.PDFVIP

第43 卷 第 5 期 水 产 学 报 Vol. 43, No. 5 2019 年 5 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA May, 2019 文章编号: 1000-0615(2019)05-1271-17 DOI: 10.11964/jfc.20180511293 大弹涂鱼皮肤黏液的抑菌活性和蛋白质组学 1 1 1 2 1* 刘宏汉 ， 姜雨婷 ， 范美华 ， 王日昕 ， 廖 智 (1. 浙江海洋大学海洋科学与技术学院，海洋生物蛋白质工程研究室，浙江 舟山 316022 ； 2. 宁波大学海洋学院，鱼类健康与进化研究室，浙江 宁波 315211) 摘要：皮肤黏液是鱼类免疫防御的第一道防线。大弹涂鱼皮肤黏液对其免疫防御、渗透 压维持以及适应水陆生活等方面具有重要意义。为深入了解大弹涂鱼皮肤黏液的蛋白质 分子组成，对其皮肤黏液开展了抑菌活性分析和蛋白质组学分析。通过电刺激法收集大 弹涂鱼皮肤黏液，采用打孔法比较了皮肤黏液和血清的抑菌活性差异；进一步利用鳗弧 菌对大弹涂鱼进行诱导，采用生长曲线抑制法分析和比较了诱导前后皮肤黏液的抑菌活 性差异。利用Shotgun质谱技术，结合大弹涂鱼皮肤转录组数据库，对大弹涂鱼皮肤黏 液开展了蛋白质组学分析；进一步利用String软件对所鉴定的蛋白质开展了蛋白质相互 作用预测。大弹涂鱼皮肤黏液具有广谱抑菌活性，鳗弧菌诱导后的大弹涂鱼皮肤黏液与 诱导前相比，对部分革兰氏阴性菌的抑菌活性明显上升，但对其他菌株的抑菌活性差异 不明显。从大弹涂鱼皮肤黏液中共鉴定各类蛋白质分子97种，基本分子组成与其他硬骨 鱼类皮肤黏液蛋白相似，但也有少数蛋白如泛素蛋白、胸腺素蛋白等未在其他鱼类皮肤 黏液中报道。此外，其他鱼类中所鉴定到的部分蛋白如热休克蛋白、抗菌肽等在大弹涂 鱼皮肤黏液中未能鉴定到。大弹涂鱼皮肤黏液中已鉴定的蛋白多数具有与免疫功能相关 的结构域，且存在一个以肌动蛋白为核心的相互作用网络。大弹涂鱼皮肤黏液具有明显 的广谱抑菌活性，其蛋白质组成与其他鱼类皮肤黏液具有一定的相似性。本研究为深入 了解大弹涂鱼皮肤黏液的分子多样性及功能机制奠定了基础。 关键词: 大弹涂鱼；皮肤黏液；蛋白质组学；免疫；抑菌活性 中图分类号: Q 71; S 942 文献标志码: A [9] 皮肤是鱼类用以保护机体的一道重要屏障。 动、排泄和信息交流等生物学功能 。因此，鱼 由于鱼类生存于水环境，与陆生生物相比，其 类皮肤黏液的相关研究在鱼类学研究中占据着 皮肤组织面临来自微生物侵袭的风险更高，各 重要地位。 种物理化学因素的影响更大，因此，鱼类皮肤 大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)属于 通过分泌黏液，与表皮细胞一起构成黏膜免疫 硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鲈形目(Perciformes)