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P47最上面 1、大规模的生产生物制品。 2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。 3、检测判断物质的毒性。 4、培养正常或各种病变的细胞,用于生理、病理、药理等方面的研究,如用于 等,为 及其他疾病提供理论依据。 阅读课本P50页 * 2.2 动物细胞工程 生产单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础。 为什么要进行动物细胞培养? 一.动物细胞培养 如何进行细胞培养? 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 (一)概念 1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? P44旁栏 提示:用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2,当pH大于6时,胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2~8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4,胃蛋白酶在此环境中没有活性,而胰蛋白酶在此环境中活性较高,因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么? P44寻根问底 提示:胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外,长时间的作用也会消化细胞膜蛋白,对细胞有损伤作用,因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 (二) 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 剪碎 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4,此环境下胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 比老龄动物的组织细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛。分化程度越低,繁殖能力越强,越容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢,核型可能变化 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 贴壁生长 接触抑制 10代以内,保持正常二倍体核型 传代培养 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养(一般) 传代培养 原代培养和传代培养、细胞株和细胞系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。叫做? 随细胞增多,细胞就会停止分裂增殖 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题: 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质? 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件? P46讨 论 充足营养(糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。) 适宜温度、PH和气体环境;无菌无毒环境 (三) 动物细胞培养的条件P46 1、无菌、无毒环境(无菌处理和添加抗生素目的?更换培养液的好处?) 2、营养与体内相同。合成培养基:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等,通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 3、温度和PH,36~37℃、7.2~7.4) 4、气体环境95%空气、5%CO2--维持培养液PH) 植物组织培养和动物细胞培养的比较 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 获得细胞或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株 培养目的 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 (四) 动物细胞培养技术的应用 筛选抗癌药物 治疗和预防癌症 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体(克隆动物) 分 类 胚胎细胞核移植: 体细胞核移植: 细胞分化程度低,恢复全能性容易 细胞分化程度高,恢复全能性不容易 (一)、 动物细胞核移植概念: (二)、体细胞核移植的过程: 请看教材P48图2-21 思考: 1.核移植的受体细胞是什么?处在什么时期?用此细胞作为受体细胞有什么好处? 2.通过什么手段激活受体细胞,构建重组胚胎? MⅡ中期卵母细胞 诱导方法:物理或化学方法激活受体细胞,完成 细胞分裂和发育进程。 卵母细胞体积大,便于操作;含有营养物质丰富,提供早期胚胎发育所需的营养;含有激活细胞核体现全能性的物质。 (二)、体细胞核移植的过程: P49讨论: 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,为什么必须先去掉受体卵母细胞的核? 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有
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