原创力文档- 1、本文档共21页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
查看更多
* 细胞内细胞因子染色法 中山医学院免疫学教研室 实验原理 细胞因子跨膜分泌阻滞剂BFA，使新产生细胞因子滞留在细胞内； 破膜剂使荧光抗体可以进入细胞内，并可以检测相应细胞因子； 流式细胞记数技术可以记数细胞，分析相应细胞的质和量。 方法特点 1. 单细胞水平计数 2. 简单、快捷、灵敏 3. 实验结果客观 实验过程 取淋巴细胞，刺激剂作用，37℃孵育1小时 加入BFA继续培养5小时，用PBS洗涤。 4%多聚甲醛室温固定8分钟后，PBS洗涤。 重悬细胞， 4℃放置几小时或过夜。 加入荧光标记抗体, 4℃避光30分钟，洗涤。 缓冲液2重悬，流式细胞记数仪检测。 结果分析 需要的缓冲液 1. 1×PBS 1升（洗细胞用） 2. PBS +0.1%BSA+NaN3 0.05% 500ml(用于染色后FACS前) 3. PBS+BSA+NaN3 +0.1%Saponin 250ml(封闭染色后用) 4. PBS +BSA+NaN3+Saponin+5%milk 40ml 流式细胞仪（FLOW CYTOMETER，FCM） 对于处在流动状态的细胞或生物颗粒进行多参数的快速的定量和分析的技术。 检测仪器：流 式 细 胞 记 数 仪 FCM结构组成部分 液流系统; 将细胞引导至检测位点 光学系统; 产生并收集光学信号 电子系统; 将光信号转换成电信号,使之数字化,输入计算机并分析。 细胞分选系统。 FLOW CELL(流动室) Injector Tip 荧光信号 聚焦的激光光束 鞘液 荧光信号 每种荧光染料均有特定的激发波长, 并激发后会有发射波长,流式细胞仪检测的即是它特定的发射波长. 利用各种不同波长的光学滤片来收集(检测)这些光学信号 荧光染料的特性 激发波长(EXCITING) 发射波长(EMISSION) 激发光源与荧光标记物 FALS Sensor Laser 前向角散射光信号 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 侧向角散射光信号 *
文档评论（0）