细胞因子药物分析.ppt

2、生产工艺相关杂质和污染物 宿主细胞蛋白含量 宿主细胞DNA IgG含量（10ng/剂量） 蛋白A含量 小牛血清残留量 残余抗生素（氨苄西林） 内毒素含量（LAL） 污染物 （1）宿主细胞蛋白含量 以双抗体夹心ELISA为宜，尽量不用斑点免疫。 常采用5种最常用的E.coli菌株混和作为ELISA测菌体蛋白含量的通用标准。 不同表达体系对菌体蛋白含量标准不同。 来自E.coli菌株的产品为不大于0.1%；来自CHO细胞的产品为不大于0.05%。 （2）宿主细胞DNA 测定方法：采用DNA杂交实验，用固相斑点杂交法，以地高辛标记检测试剂盒或者用同位素标记DNA探针进行测定，必须提供相应宿主细胞DNA标准品。 现行生物制品规程对宿主细胞DNA残留量标准作了相应调整： 由小于100pg/剂量调整为小于10ng/剂量。 宿主细胞DNA只作为一种细胞污染因素不作为一种危险因素。 （3）污染物 产品污染物是指带入的外源性物质而不是生产工艺的一部分，如化学及生化物质(微生物蛋白酶)和/或微生物。 应严格避免污染物，并用合适的认可标准或内控限值来控制其限度。 外源性病毒和支原体污染。 产品相关杂质(如前体、某些降解产物)是在生产和/或贮存过程中产生的分子变异体，这些变异体在活性、有效性及安全性方面与预期产品相比，不占主导地位。 3、产品有关杂质 截短式（Truncated forms），蛋白质/多肽中失去氨 基酸或内部裂解。 去酰胺化，异构化，S－S链误联，氧化形式等。 聚合类杂质，包括双聚体、多聚体。 八、安全性及其他检测项目 无菌试验 热源试验 异常毒性试验 免疫原性检查 水分、装量、pH检测 几种生物技术药物检验项目表 IFNα2b原液 1、蛋白含量 8、宿主菌蛋残留量≤总蛋白质的0.1% 2、等电点 4.0～6.7 9、鼠IgG含量≤100 ng/剂量 3、电泳纯度≥95.0%分子量 19.2Kg±10% 10、残留外源性DNA ≤10ng/剂量 4、HPLC纯度≥95.0% 11、残留抗生素活性 5、紫外光谱扫描应为 278nm±3nm 12、细菌内毒素含量≤10Eu/300万IU 6、比活性≥1.0×106IU/mg 蛋白 13、无菌试验 7、肽 图 几种细胞培养测定方法比较 3H-thymidine BrdU MTT Alamar Blue 靶向物 DNA合成系统 线粒体电子传递系统 检出细胞的状态 增殖 增殖、生存 检出法 放射活性 色素、荧光 色素 色素、荧光 抽出的必要性 + + + - 其他试剂的必要性 + ++ + - 成本（以MTT为1时） 60 80-100（试剂盒） 1 2 缺点 使用同位素 不适合 检出大量未增殖 检出未增 浮游细胞 细胞，处理时费力 殖活细胞 生物学活性测定分析方法 1、用能诱导50%最大反应的待测样品最高稀释度作为参考效价（或滴度），或以此稀释度中所含样品的量为1单位，即以此稀释度的倒数为待测样品