第十二届国际生物奥林匹亚竞赛.docVIP

PAGE PAGE 3 第十二屆國際生物奧林匹亞競賽 布魯塞爾 比利時 July 8-15,2001 實驗部分 實驗三：植物色素分析 在實作測驗中，期望你證明對生物學基本方法，操作技術的熟悉度，且能運用在實驗中。 此部份測驗將包含一系列試題，組成四個不同的實驗如下： 實驗一：植物解剖、形態及分類 實驗二：動物解剖、形態 實驗三：植物色素分析 實驗四：行為學 你大約在60分鐘內完成每一個實驗。每一實驗最高可得50分，及整個實作測驗總分為200分。如果有些試題你答錯某些選項，同時也答對某些選項，你將會被倒扣。 光合作用色素之逆向薄層色層分析 『引言』【注意！非常重要，不可略過】 薄層色層分析是分析分子的重要技術。生物學家與生化學家如何能對如蛋白質、脂質及植物色素有如此深入的了解？答案是他們已經分離、分析並研究這些分子超過一世紀。而分析這些分子最重要的技術之一，就是薄層色層分析（TLC）。此技術能依據分子對親水性的固定相與厭水性的移動相的相對親和力，將不同的分子分開。固定相經常是附在玻璃或金屬板上的一層矽膠薄膜。而移動相則是適當溶劑的混合液。雖然TLC已經逐漸被一些新穎、高效率、高精確的技術所取代，TLC仍然是初步定性分析植物色素最簡單有效的方法。 分析光合作用色素時可能產生一些問題，例如色素可能與H2SiO3分子反應，產生去鎂葉綠素雜在矽膠中；此實驗上的問題可以用改良過的矽膠解決，即將極性功能基加上18C的長鏈使其飽和，如此產生一種非極性的矽膠，此一技術特別稱之為「逆向」TLC（RP－TLC），並配合適當的溶劑為移動相（例如：含乙烯醋酸、甲醇及水的混合溶液）。 每位學生有的器材藥品 色層分析槽（200/250毫升燒杯，盛有少量但足夠體積的溶劑，並蓋上培養皿） 40×100mm大小的TLC片，在60~80℃中至少乾燥360分鐘（1片備用） 鉛筆 尺 1片鋁箔 3支20ml玻璃試管 10ml量筒 化學試劑：石油醚40~60%（A瓶）；丙酮100﹪（B瓶） 蒸餾水（在試管中） 細砂（在試管中） 研缽和杵 2根20?l毛細管 豆科植物 含實驗步驟的試題 選擇題 答案紙 題組一 利用逆向TLC分離並辨認植物色素 回答有關TLC及植物色素的選擇題（使用1號答案紙） 在2號答案紙中空格填上答案 完成本節實驗後，每位學生需交出2份答案卷及1片TLC片。 問題一：以逆向TLC分離並辨識色素 準備工作（約需15分鐘） 取約8cm2之植物撿體 在研缽中加入植物組織及少量砂粒研磨 加入100﹪丙酮（約10ml）（B瓶） 將檢體倒入試管中，使沈澱約5分鐘（此時你可以準備TLC片，參考步驟7） 加入約20滴石油醚（A瓶）和約5ml蒸餾水 充分搖擺混合，靜置約1分鐘，使之分為兩層 取一片TLC，用鉛筆小心在離底部1.5公分處劃上一條起始線。 點上檢體（約需5分鐘） 用小毛細管將色素萃取物點在起始線上，共點3個位置（小心，勿刮壞TLC片） 輕輕吹乾 重複4至5次 進行實驗（約需5分鐘） 將TLC片放在槽中，將色層分析槽蓋上鋁箔，在置於暗處展開。 注意：利用這段時間解答選擇題（問題2） 約20分鐘後，取出TLC片；或在液體上升至離頂端1公分時即取出TＬＣ片。 解釋實驗解果 標記展開液前緣（用鉛筆）。 在答案上劃出你TLC板上展開的情形，包括前緣即起始線，以及所看到的色素。 計算出你分離之光合色素的Rf值。 『注釋』：Rf值大於或等於0.4的光合作用，色素可能會很淡。以此RP－TLC為例： 新葉黃素Rf＝0.6 紫葉黃素Rf＝0.5 黃體素Rf＝0.4 儘管再小心，pheophytins也可能出現，如果它真的出先在TLC上，顏色應該是灰藍色的昏影。我們不應該將pheophytins視為光合作用色素，因為它是光合色素經化學作用產生的衍生物。 在你劃出的TLC結果圖中，標示出每一看到的光合作用色素；並以數目字代表每一點，以Rf最小的一種為No. 1，以此類推。試著分辨出4種光合作用色素。 用鋁箔包住你的TLC片，以防色素顏色褪色。 利用選擇題上所提供的所有資料，將答案填在2號答案紙上。 題組二 請回答下述與TLC及植物色素相關之題目（單選題，請選出最適合的答案）。 評分方式 正確答案 ＋2分 錯誤答案 －1分 無作答 無分數 請把答案填寫於1號答案紙 下列何者為正確之敘述 植物因具有葉綠體，因此可以在只有粒線體的狀況下存活。 葉綠素及血基質均具備一個很強的雙價鏈鍵結系統，使它們可以吸收可見光。 葉綠素在光合作用中扮演的角色與血基質在粒線體中電子傳遞作用所扮演的角色相仿。 上述各項均為錯誤的敘述。 研究主要植物色素的分子構造，藉以預測這些植物色素在極性及非極性溶劑中的相對溶解度（請參閱10頁中之圖示）；去推論這些植物色素的量，下列何種原子最適合？ 氫