质谱在生物医学中的应用.ppt

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质谱在生物医学中的应用; *在质谱仪中,物质分子被打成碎片,形成正负气相离子,并对这些气相离子进行分离检测。 *把这些碎片离子的质量和它们的相对丰度显示在质谱图上。大多数化合物可产生独特而清晰的图谱。 *大多数物质都可以用它们的质谱图加以鉴定。质谱仪在物质的化学结构分析中具有重要的作用。 *质谱图的构成及所包含的信息。 ;Ion Source;;Mass spectrum of hexane MW=86 CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3;Chloroethane CH3-CH2-Cl;乙醇 CH3-CH2-OH;质谱仪的构造 为了得到质谱,必须首先将试样蒸发变成气态,电离,碎裂成分子碎片。然后按它们的质--荷比(m/z值)分离各种离子,最后加以检测。 完成这些要求所需的仪器有四个主要部分: A、蒸发用的进样系统; B、离子源——用于电离试样,并使分子碎裂; C、质量分析系统; D、检测系统。;进样系统: 条件:低压(10-4 ~ 10-7 torr, 高真空)和较高温度(300℃) *在这种条件下,很多难挥发的化合物才可形成足够的蒸气。 *要达到这么高的真空度,是一件很难的技术,直到近二、三十年才获解决。 真空泵:普通机械泵+分子扩散泵或涡轮分子泵。 离子源 离子源是质谱仪的心脏,是试样电离和碎裂的场所。;最常用的电离法是电子轰击法,即高能电子束从试样分子中撞出一个电子而产生正负离子: M + e- ? M+ + 2e- 式中:M为待测分子; M+ 为分子离子 电子束产生各种能态的M+ 。产生的某些分子离子带有较高的内能,可进一步产生碎裂反应。 M1 + ? M3+ M+ —— 等等。 M2 + ? M4+ M1 + ,M2 + ,M3+ ,M4+ 是低质量的离子,其它一些分子离子因内能较低不产生碎裂反应。 ;*通常电子束的能量被控制在70 eV(电子伏特) *大多数共价分子的电离能为10 eV,70eV足以从较高能级的分子轨道撞出一个电子。 *电子束的稳定性最为重要。 (在正常条件下,每引入1000个分子到离子源,仅有大约1个分子发生电离,其余中性分子被位于离子源外的大容量扩散泵抽出) *在排斥极的作用下,正离子进入离子枪,受到加速,并通过透镜聚焦。 质量分析系统 最常用的是:扇形磁分析器(见图);Mass Spectrometry;Mass Spectrometry;Mass Spectrometry;;;;飞行时间质谱 Time Of Flight (TOF);LC-MS (离子阱)联用仪器;离子检测器 —— 光电倍增管 电子计算机 质谱的解释 常见化合物的质谱图库(计算机检索。达10万个化合物之质谱图) 定量分析 Selective ion detection Total ion peak ion abundance 标准曲线法;hn;Liquid Chromatography;Protein Identification Using Tandem Mass Spectrometry;Outline;Proteomics Context;2D Gel Electrophoresis (双向电泳);Sample Preparation for Tandem Mass Spectrometry;Single Stage MS;Tandem Mass Spectrometry (MS/MS);Peptide Fragmentation;Mass analyzer;Information-dependent LC-MS-MS of tryptic digest using a Q-TOF MS

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